Biossensor amperométrico de metaloproteinase-7 da matriz aprimorado por nanocompósitos de carbono funcionalizados com Pd

Resumo

A metaloproteinase-7 da matriz desempenha um papel fundamental na progressão tumoral e metástase como uma enzima que pode degradar a composição da matriz celular e clivar os peptídeos entre a alanina e a leucina em vários processos de ativação biomolecular. Neste trabalho, um nanocompósito de carbono funcionalizado com Pd foi projetado como um novo intensificador de impedância para um sensor amperométrico de MMP-7. Nanopartículas de Pd no potenciador podem catalisar a oxidação de 4-cloro-1-naftol com H ₂ O ₂ para gerar precipitação insolúvel in situ, formando precipitação de alta resistência nos eletrodos. Além disso, as nanoesferas de carbono pouco condutoras do nanocompósito aumentaram a resistência à precipitação, causando ainda um aumento dramático na resistividade do intensificador e, subsequentemente, uma diminuição significativa na corrente. Isso pode promover significativamente a diferença de sinal atual entre o biossensor tratado com e sem o analito alvo, o que está diretamente relacionado à sensibilidade do biossensor amperométrico. No geral, o biossensor eletroquímico pode detectar com sensibilidade MMP-7 na faixa de 100 fg mL ⁻¹ a 100 ng mL ⁻¹ com um limite de detecção para MMP-7 de 17,38 fg mL ⁻¹ .

Histórico

A metaloproteinase-7 da matriz (MMP-7), uma enzima que pode degradar a composição da matriz extracelular [1], é destacada por seu papel fundamental na progressão tumoral e metástase [2, 3]. O conteúdo de MMP-7 em amostras de soro está associado a metástases em linfonodos em pacientes com alguns tipos de câncer, como câncer de glândula salivar [4], adenocarcinoma de cólon [5] e carcinoma de células renais de alto grau [6]. Devido às suas várias funções nos processos fisiológicos, a detecção precisa e de alta sensibilidade de MMP-7 tem atraído intensa atenção de pesquisa [7], levando ao desenvolvimento de várias abordagens, incluindo colorimetria [8], eletroquimioluminescência (ECL) [9] e fluorescência análise de transferência de energia de ressonância (FRET) [10]. No entanto, o limite de detecção (LOD) dessas abordagens está normalmente na faixa de picogramas e, portanto, não é baixo o suficiente. Comparados a esses métodos, os biossensores eletroquímicos oferecem capacidades de detecção de MMP-7 muito mais avançadas com menor LOD no nível de femtograma [11]. Além disso, alguns métodos analíticos foram construídos para atender a necessidade urgente de detecção eletroquímica ultrassensível de MMP-7 usando ensaios eletroquímicos devido ao seu baixo custo e miniaturização [12].

Em muitos protocolos eletroquímicos, a reação biocatalítica enzimática é aplicável na amplificação de sinal para promover o desempenho do biossensor amperométrico [13, 14]. No entanto, era bem conhecido que a enzima, o catalisador mais amplamente utilizado em reações catalíticas, tinha deficiências óbvias tanto na atividade de sensibilidade ambiental quanto nas baixas estabilidades [15,16,17,18,19]. Portanto, o desenvolvimento de um catalisador altamente eficiente e estável é uma prioridade na construção de um ensaio eletroquímico ultrassensível para detecção de MMP-7. Pd é um material de metal nobre com propriedades catalíticas superiores e possui alta estabilidade química em reações catalíticas [20, 21]. Além disso, o material de carbono pode atuar como um suporte químico inerte em catalisadores para adsorver materiais de metal nobre e reter as propriedades catalíticas [22, 23].

Considerando as situações acima, projetamos um nanocompósito de carbono funcionalizado com Pd como um intensificador de impedância para aumentar drasticamente a sensibilidade de um ensaio amperométrico de MMP-7, que tem as duas funções a seguir. (1) As nanoesferas de carbono são um material de má condução [24]; (2) Nanopartículas de Pd podem catalisar a oxidação de 4-cloro-1-naftol com H ₂ O ₂ para gerar precipitação insolúvel in situ, formando precipitação de alta resistência nos eletrodos [25]. Esses dois fatores aumentam a resistividade e reduzem significativamente a corrente, o que pode melhorar notavelmente a sensibilidade do biossensor para ter um baixo LOD de 17,38 fg mL ⁻¹ . O nanocompósito funcionalizado com Pd construído para reação de precipitação catalítica é prático em ensaios amperométricos de MMP-7 com alta seletividade e sensibilidade.

Métodos

Material

HAuCl ₄ · 3H ₂ O, H ₂ PtCl ₄ , 4-CN, glicose, H ₂ O ₂ (30%), trombina de soro bovino (TBS) foram adquiridos de Alfa Aesar (Tianjin, China). O óxido de grafeno (GO) foi adquirido da JCNANO (Nanjing, China). A albumina de soro bovino (BSA, grau padrão) foi obtida comercialmente da Beijing Xinjingke Biotechnologies Co., Ltd. (Pequim, China). O peptídeo (NH ₂ -KKKRPLALWRSCCC-SH) foi obtido da Science Peptide Biological Technology Co., Ltd. (Xangai, China). A enolase específica do neurônio (NSE) e o antígeno específico da próstata (PSA) foram adquiridos na Shanghai Linc-Bio Science Co. Ltd. (Shanghai). A metaloproteinase-2 da matriz (MMP-2) foi adquirida a Yeasen Biotechnologies Co., Ltd. (Shanghai, China). MMP-7 foi fornecido pela Sino Biological Inc. (Pequim, China). Amostras clínicas de soro humano foram adquiridas por ZhongKe ChenYu Biotech (Pequim, China). Todas as soluções aquosas foram preparadas com água ultrapura (resistividade> 18 MΩ cm). A solução tampão de fosfato (PBS) contém KCl 0,1 M e tampão fosfato 10 mM (pH =7,4).

Aparelho

A síntese de microondas foi realizada através do reator de microondas CEM Discover® SP (CEM, EUA). Imagens de microscópio eletrônico de varredura (SEM) foram obtidas usando HITACHI S-4800 SEM (HITACHI, Japão). As imagens do microscópio eletrônico de transmissão (TEM) foram obtidas no HITACHI H7650 TEM (HITACHI, Japão). A espectroscopia de energia dispersiva de raios-X (EDS) foi determinada em HITACHI SU8010 SEM (HITACHI, Japão). Todas as medições eletroquímicas foram realizadas na estação de trabalho eletroquímica CHI600 (Chenhua Instruments Co., Shanghai, China). Um eletrodo de carbono vítreo (GCE) (4 mm de diâmetro) foi utilizado como eletrodo de trabalho, um fio de platina e um eletrodo de Ag / AgCl como contraeletrodo e eletrodo de referência, assim, foi construído um três sistemas eletroquímicos em experimento. Imagens de microscópio eletrônico de transmissão de alta resolução (HR-TEM) foram realizadas por Tecnai G ² F30 TEM abaixo de 300 kV acelerando.

Síntese dos nanocompósitos de carbono funcionalizados com Pd

Nanocompósitos de carbono funcionalizados com Pd (Pd-CNCs) foram sintetizados de acordo com uma literatura previamente relatada [26]. Resumidamente, 4 g de glicose foram dissolvidos em 40 mL de água ultrapura para formar uma solução límpida. A solução acima foi então transferida para uma autoclave de aço inoxidável forrada com Teflon de 50 mL e mantida a 170 ° C por 5 h. Após a reação, a solução transparente mudou para marrom escuro. As nanoesferas de carbono obtidas foram coletadas por centrifugação e lavadas com água ultrapura / etanol várias vezes. Os produtos resultantes foram redispostos em 8 mL de água ultrapura.

Para funcionalizar nanopartículas de Pd em nanoesferas de carbono [24], 1 mL de suspensão de nanoesferas de carbono foi misturada com 25 μL de HPdCl ₄ solução. A mistura foi reagida em um instrumento de reação de micro-ondas (250 W) a 100 ° C por 15 min e, em seguida, resfriada até a temperatura ambiente naturalmente. Em seguida, as nanoesferas de Pd-carbono obtidas foram centrifugadas, lavadas com água ultrapura e redispostas em 1 mL de água ultrapura.

Para evitar a adsorção inespecífica de MMP-7, o BSA foi posteriormente modificado nas nanoesferas de Pd-carbono. A suspensão de nanoesferas foi agitada com 100 μL de solução de BSA (1% em peso) por 1 h em temperatura ambiente. Após várias etapas de centrifugação e lavagem, as nanoesferas de Pd-carbono modificadas com BSA foram redispostas em água ultrapura e armazenadas a 4 ° C para experimentos posteriores.

Eletrodeposição Au-rGO em GCE

Antes da modificação, o GCE foi polido com 0,05 μm de pasta de alumina e a sonicação lavada em água ultrapura e etanol, respectivamente. A solução de eletrodeposição foi configurada pelas seguintes etapas [27]. Primeiramente, 8 mg de pó GO foi disperso em 20 mL de água ultrapura sob sonicação por 2 h. Em seguida, 200 μL de HAuCl ₄ solução (4% em peso) foi adicionada à suspensão GO. Posteriormente, a eletrodeposição de Au-rGO em GCE pela técnica de voltametria cíclica (CV) na faixa entre 1,5 e - 1,5 V com a taxa de varredura de 50 mV s ^{- 1} na solução de eletrodeposição acima. Finalmente, o GCE depositado com Au-rGO (Au-rGO / GCE) foi lavado com água ultrapura para remover a solução de eletrodeposição residual e, em seguida, seco com nitrogênio à temperatura ambiente.

Fabricação do biossensor

O Au-rGO / GCE foi incubado com solução de peptídeo de 40 μL (50 μM) por 40 min a 37 ° C. Posteriormente, o peptídeo modificado no GCE foi ativado com 50 μL de solução de glutaraldeído (0,10% em peso) por mais 30 min (peptídeos / Au-rGO / GCE). Em seguida, 20 μL de suspensão de Pd-CNCs foram colocados no eletrodo modificado com peptídeo por 1 h (Pd-CNCs / peptídeos / Au-rGO / GCE). Após cada etapa de modificação, o eletrodo modificado foi lavado com água ultrapura.

Medição eletroquímica

Oitenta microlitros de solução MMP-7 (1 ng mL ⁻¹ ) foi incubado com Pd-CNCs / peptídeos / Au-rGO / GCE por 1 h a 37 ° C e suficientemente lavado com água ultrapura. Em seguida, 50 μL de solução de 4-CN 1,0 mM contendo H ₂ 10 mM O ₂ foi descartado para prosseguir a reação de precipitação durante 50 min. Finalmente, a medição de voltametria de onda quadrada (SWV) foi conduzida de - 0,2 a 0,6 V em 5 mM [Fe (CN) ₆ ] ^{3− / 4−} solução tamponada com fosfato (0,1 M, pH =7,4) com amplitude de pulso de 25 mV e um potencial de aumento de 4 mV s ⁻¹ .

Resultados e discussão

Princípio do biossensor de clivagem de peptídeo

O processo de construção do biossensor com base na clivagem de peptídeo é ilustrado no Esquema 1. Primeiro, Au-rGO foi depositado no eletrodo de carbono vítreo (GCE) por meio de um método eletroquímico e, em seguida, os peptídeos foram imobilizados em Au-rGO por meio de ligação Au-S. Pd-CNCs foram compostos como um intensificador catalítico, e o glutaraldeído foi selecionado como o ligante químico entre o peptídeo e os intensificadores. 4-CN e H ₂ O ₂ foram empregados como substratos de precipitação catalisada para aumentar a impedância. Particularmente, a MMP-7 foi escolhida como a enzima de clivagem de peptídeo entre alanina (A) e leucina (L) em peptídeos [8], o que causou uma alteração indistinta do sinal de corrente medida por SWV. A eletrodeposição de Au-rGO no GCE tem duas vantagens:(1) Au-rGO pode melhorar efetivamente a condutividade da interface de detecção; e (2) permite que os locais imobilizem os peptídeos. Aproveitando a alta impedância e o desempenho catalítico dos Pd-CNCs, ΔI foi então amplificado substituindo os Pd-CNCs pela clivagem do peptídeo específico (NH2-KKKRPLALWRSCCC-SH). Este fenômeno é contribuído para a baixa condutividade elétrica de Pd-CNCs e alta impedância de precipitação gerada a partir da oxidação de 4-CN com H ₂ O ₂ catalisado por Pd-CNCs.

Ilustração esquemática da nanosfera de carbono funcionalizada com Pd como um intensificador de impedância para o ensaio amperométrico de MMP-7

A reação de precipitação catalítica no GCE foi ainda caracterizada por microscopia eletrônica de varredura (SEM) pela incubação de Pd-CNCs na superfície dos peptídeos / Au-rGO / GCE (Fig. 1a). Pd-CNCs foram revestidos com uma camada insolúvel após a reação de precipitação, indicando que a camada insolúvel de baixa condutividade foi formada no eletrodo modificado (Fig. 1b). Portanto, um biossensor para detecção ultrassensível de MMP-7 foi estabelecido com sucesso a partir da amplificação de sensibilidade atraída tanto pela clivagem do peptídeo quanto pela precipitação catalítica.

Imagens SEM de Pd-CNCs / peptídeos / Au-rGO / GCE ( a ) tratado com reação de precipitação catalítica ( b )

Caracterização dos Pd-CNCs

Por um método hidrotérmico típico, Pd-CNCs homogêneos foram preparados com sucesso. As morfologias das nanoesferas de carbono, nanoesferas de Pd-carbono e Pd-CNCs foram caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão (TEM) e espectrometria de energia dispersiva de raios-X (EDS). Nanopartículas de Pd foram formadas e distribuídas nas nanoesferas de carbono após a reação de microondas (Fig. 2b), demonstrando o sucesso na preparação de nanoesferas de Pd-carbono com diâmetros de 150 nm (Fig. 2a). As morfologias de Pd-CNCs são mostradas na Fig. 2c. Os resultados do EDS confirmam as composições químicas das nanopartículas de carbono, nanoesferas de Pd-carbono e Pd-CNCs, o que mostra que as nanopartículas de carbono contêm C e O (Fig. 2d). Após a funcionalização das nanopartículas de Pd, o Pd também existia nos espectros das nanoesferas de Pd-carbono (Fig. 2e), enquanto S e N encontrados nos espectros de Pd-CNCs originam-se de BSA, que foi usado para bloquear as nanoesferas de Pd-carbono ( Fig. 2f). Esses resultados revelam intuitivamente a síntese bem-sucedida dos intensificadores catalíticos Pd-CNC. Imagens HR-TEM de nanoesferas de Pd-carbono (Fig. 3a) ilustram que as nanopartículas de Pd funcionalizadas (Fig. 3b) estão na fase cúbica do centro da face (FCC) com um plano de rede observável (1,1,1) (Fig. 3c). As imagens correspondentes da transformação rápida de Fourier (FFT) (Fig. 3d) também suportam a natureza cristalina FCC das nanopartículas de Pd.

Micrografias TEM de nanosfera de carbono ( a ), Nanoesferas de carbono Pd ( b ) e Pd-CNCs ( c ) EDS da nanosfera de carbono ( d ), Nanoesferas de carbono Pd ( e ) e Pd-CNCs ( f )

Imagens HR-TEM de nanoesferas de carbono Pd ( a ), imagens ampliadas de nanopartículas de Pd ( b, c ) e imagens FFT de nanopartículas de Pd ( d )

Caracterização dos procedimentos de construção do biossensor

Os procedimentos de construção do biossensor foram monitorados por medidas de SWV (Fig. 4a) e espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS) (Fig. 4b). Em comparação com o sinal de corrente de GCE nu (curva GCE nua), a corrente de pico na faixa de potencial aumentou para cerca de 420 μA (curva Au-rGO / GCE) após eletrodeposição de Au-rGO, o que pode ser atribuído à excelente condutividade de Au-rGO. Em seguida, o pico da corrente de sinal diminuiu após a imobilização de peptídeos no eletrodo (peptídeos de curva) e foi ainda mais reduzido após a ligação entre peptídeos e Pd-CNCs devido à alta impedância dos peptídeos e potenciadores (curva de Pd-CNCs). Após incubação com MMP-7, a corrente de pico aumentou (curva de clivagem de MMP-7), o que pode ser causado pela clivagem específica de peptídeos por MMP-7 e remoção parcial de potenciadores da superfície do eletrodo. Nas mesmas condições, a mudança atual (ΔI ₁ ) entre as curvas “Pd-CNCs” e “clivagem de MMP-7” foi calculado em 48,7 μA. Em seguida, o pico de corrente foi reduzido após a reação de precipitação catalítica de 4-CN, com um pico de corrente de 136,1 μA (curva de precipitação de clivagem MMP-7). Em contraste, o biossensor sem MMP-7 induziu um pico de corrente inferior (54,9 μA, precipitação da curva), que foi declarado como o sinal em branco, após a reação de precipitação catalisada. Nessas circunstâncias, ΔI ₂ foi a diferença de sinal atual entre as curvas “precipitação” e a curva “precipitação da clivagem de MMP-7”, aumentando de 48,7 para 81,2 μA. O EIS também foi usado para monitorar a fabricação do biossensor. A resistência de transferência de elétrons correspondeu ao diâmetro do semicírculo dos gráficos de Nyquist (Fig. 4b). Para comparação, o gráfico dos peptídeos / Au-rGO / GCE (peptídeos de curva) exibe um semicírculo maior e, portanto, maior resistência, do que aqueles de Au-rGO / GCE (curva Au-rGO / GCE) e GCE nua (curva nua GC) que possui o menor círculo, indicando que os peptídeos foram modificados com sucesso no GCE. A resistência aumentou quando os peptídeos foram ligados ao potenciador via glutaraldeído (curva Pd-CNCs). O diâmetro do semicírculo diminuiu ligeiramente (clivagem da curva MMP-7) após a incubação com MMP-7, que pode ser atribuída à MMP-7 clivou especificamente os péptidos. Em contraste, a resistência aumentou significativamente quando o biossensor foi mergulhado na solução de 4-CN e H ₂ O ₂ (precipitação da curva) _. Passando por ambas as reações de clivagem de peptídeo e precipitação catalítica, a resistência diminuiu obviamente (curva de precipitação de clivagem de MMP-7).

SWV ( a ) e EIS ( b ) respostas do processo de modificação do eletrodo em 5 mM [Fe (CN) ₆ ] ^{3− / 4-} tamponado com fosfato (0,1 M, pH =7,4)

Otimização das condições de detecção

A quantidade e o tempo de incubação dos peptídeos, fatores importantes para o desempenho de detecção do biossensor, foram otimizados ainda mais. Verificou-se que o sinal de corrente diminuiu em conformidade quando a concentração de peptídeo aumentou de 20 para 40 μM e manteve-se constante entre 50 e 80 μM (Fig. 5a). Para evitar a adsorção inespecífica, escolhemos 50 μM para medições subsequentes e, em seguida, otimizamos o tempo de incubação do peptídeo de 50 μM (Fig. 5b). A corrente de SWV diminuiu gradualmente de 20 para 40 min, então permaneceu constante após 40 min. Assim, 40 min foi escolhido como o tempo de incubação para os peptídeos. O tempo de reação de clivagem também é um fator significativo para o desempenho analítico do biossensor (Fig. 5c). O sinal do biossensor aumentou quando o tempo de clivagem variou entre 30 e 50 min, então permaneceu constante após 50 min, sugerindo que o peptídeo foi completamente clivado. Assim, 50 min foi escolhido como o tempo de clivagem para os seguintes experimentos. A reação de precipitação, que também influencia a sensibilidade do biossensor (Fig. 5d), aumentou em 50 min, e o sinal eletroquímico diminuiu continuamente. Uma vez que o sinal de corrente se manteve constante com um aumento adicional no tempo de reação, 50 min foi selecionado como o tempo de reação de precipitação para o ensaio seguinte.

Efeitos da concentração de peptídeo ( a ), tempo de incubação de peptídeo 50 μM ( b ), tempo de clivagem do peptídeo ( c ) e tempo de reação de precipitação ( d ) nas respostas atuais do biossensor

Desempenho do biossensor proposto

Após incubação com diferentes concentrações de MMP-7 nas condições ideais, o desempenho do biossensor proposto foi determinado. Conforme mostrado na Fig. 6, com a diminuição da concentração de MMP-7, o sinal de SWV diminuiu. O gráfico de calibração revela uma boa relação linear entre os picos atuais e o logaritmo das concentrações de analito na faixa de 0,1 pg mL ⁻¹ a 100 ng mL ⁻¹ . A equação linear foi determinada como sendo ( I =- 16,53lgCMMP-7-137,26) com um coeficiente de correlação de 0,9967. O limite de detecção do biossensor foi de 17,38 fg mL ⁻¹ para MMP-7 a uma razão sinal-ruído de 3 (S / N =3; é o desvio padrão do sinal em uma solução em branco). Em comparação com relatórios recentes sobre detecção de clivagem de peptídeo de MMP-7, o biossensor exibiu um melhor desempenho analítico (Tabela 1).

a Respostas SWV de detecção eletroquímica para MMP-7 em 5 mM [Fe (CN) ₆ ] ^{3− / 4−} tamponado com fosfato (0,1 M, pH =7,4) nas concentrações de 100 fg mL ⁻¹ a 100 ng mL ⁻¹ . b Curva de calibração linear da corrente e o logaritmo da concentração de MMP-7. As barras de erro são desvios padrão para n =3

Avaliação do desempenho do imunossensor

Para avaliar a reprodutibilidade do biossensor, três eletrodos modificados foram incubados com 0,01, 0,1, 1, 10 e 100 ng mL ⁻¹ MMP-7. Os desvios padrão correspondentes foram calculados em 1,3%, 1,4%, 4,0%, 1,0% e 3,0%, respectivamente, indicando boa reprodutibilidade do biossensor. MMP-2, NSE, PSA, TBS e BSA foram usados como distrações para analisar a especificidade deste biossensor. Nenhuma resposta óbvia foi observada quando o biossensor foi incubado com misturas individuais de 1 ng mL ⁻¹ MMP-7 com (100 ng mL ⁻¹ cada) MMP-2, NSE, PSA, TBS e BSA. Comparado com o biossensor incubado com apenas 1 ng mL ⁻¹ MMP-7, os sinais de corrente de cada mistura foram quase os mesmos (Fig. 7a), o que demonstra que o biossensor apresenta excelente especificidade para MMP-7. Para investigar a estabilidade, o biossensor construído foi armazenado a 4 ° C por 28 dias, e seu desempenho para detecção de MMP-7 foi avaliado a cada 7 dias (Fig. 7b). Os desvios padrão relativos (RSD) entre os experimentos paralelos foram todos inferiores a 10%, o que implica estabilidade notável do biossensor.

Respostas atuais de SWV ( a ) sobre a capacidade anti-interferência do biossensor (as barras de erro são desvios padrão para n =3). As concentrações de distrações:MMP-2 (100 ng mL ⁻¹ ), NSE (100 ng mL ⁻¹ ), PSA (100 ng mL ⁻¹ ), THR (100 ng mL ⁻¹ ) e BSA (100 ng mL ⁻¹ ), respectivamente. A mistura contém todas essas distrações (100 ng mL ⁻¹ ) e MMP-7 (1 ng mL ⁻¹ ) Respostas SWV ( b ) dos biossensores propostos armazenados a 4 ° C por tempo diferente para a detecção de 1 ng mL ⁻¹ MMP-7

Para investigar a praticabilidade do método proposto, foram realizados experimentos de recuperação. As recuperações variaram de 86,3 a 117,2% (Tabela 2), indicando ainda a promissora praticabilidade do biossensor em análises clínicas.

Conclusões

Em resumo, um nanocompósito de carbono funcionalizado com Pd foi fabricado como um novo intensificador de impedância, que revela H ₂ promissor O ₂ desempenho catalítico para oxidação 4-CN. Utilizando a alta impedância da precipitação insolúvel de 4-CN oxidada no eletrodo, um biossensor amperométrico para detecção de MMP-7 foi construído. O biossensor possui sensibilidade comparável, uma ampla faixa de detecção, boa praticidade e excelente seletividade para a detecção de MMP-7, o que sugere sua aplicação potencial em várias bioaplicações. Nosso trabalho destaca ainda a importância do intensificador de impedância na melhoria do desempenho dos ensaios amperométricos, incentivando a fabricação de novos intensificadores com atividade catalítica avançada e alta resistência.

Abreviações

4-CN:: 4-cloro-1-naftol
BSA:: Albumina sérica bovina
EDS:: Espectroscopia de energia dispersiva de raios-X
FCC:: Cúbico no centro do rosto
FFT:: Transformação rápida de Fourier
GCE:: Eletrodo de carbono vítreo
GO:: Óxido de grafeno
HR-TEM:: Microscópio eletrônico de transmissão de alta resolução
LOD:: Limite de detecção
MMP-2:: Metaloproteinase-2 da matriz
MMP-7:: Metaloproteinase-7 da matriz
NSE:: Enolase específica do neurônio
PBS:: Solução tampão de fosfato
Pd-CNCs:: Nanocompósitos de carbono funcionalizados com Pd
PSA:: Antígeno específico da próstata
RSD:: Desvios padrão relativos
SEM:: Microscópio eletrônico de varredura
SWV:: Voltametria de onda quadrada
TBS:: Trombina de soro bovino
TEM:: Microscopia eletrônica de transmissão

Preparação assistida por ácido sulfúrico de pontos poliméricos carbonizados emissores de vermelho e a aplicação de bioimagem Propriedades de síntese hidrotérmica e conversão ascendente de cerca de 19 nm Sc2O3:Er3 +, Yb3 + Nanopartículas com investigação detalhada do mecanismo de transferência de energia

Nanomateriais

Materiais Poliméricos

biológico

Corante

Especiarias