Nanossensibilizador Magnético Direcionado a HER2 Melhora MRI In Vivo para Cânceres HER2-Positivos

Introdução

Receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano (HER2), pertencente à família receptor fator crescimento epidérmico (EGFR), desempenha papel chave em malignidades humanas e superexpresso em aproximadamente 30% cânceres mama humanos [1] e muitos outros tipos, incluindo carcinomas estômago, bexiga, ovário, pulmão [1,2,3,4]. Pacientes com câncer mama HER2-superexpresso tendem taxas sobrevivência substancialmente menores que pacientes com cânceres HER2 não-superexpresso [5]. Além disso, superexpressão HER2 leva metástase câncer mama aumentada [6,7,8]. Por isso, HER2 serve biomarcador importante diagnóstico câncer. Em ambiente clínico, HER2 usado como marcador biológico típico, junto com receptor estrogênio (ER) e receptor progesterona (PR), diagnosticar câncer mama. Assim, pacientes recebem diagnóstico definitivo após verificação histológica expressão HER2, ER, PR. No entanto, verificação histológica invasiva e realizada apenas número limitado lesões. Por isso, várias pesquisas conduzidas visualizar marcadores diagnóstico não-invasivamente via exame radiológico antes verificação histológica baseada tomografia computadorizada [9, 10], tomografia emissão pósitrons [11,12,13], tomografia computadorizada emissão fóton único [14,15,16], ressonância magnética (MRI) [17,18,19,20], ferramentas imagem multimodal [21,22,23].

Nanopartículas óxido ferro (IONPs) usadas vários exames radiológicos não-invasivos observação biomarcadores clinicamente relevantes [24, 25]. IONPs compatíveis imagem molecular porque têm maior sensibilidade magnética ou biocompatibilidade que outros agentes contraste MRI baseados metais pesados como agentes contraste baseados gadolínio (GBCAs) ou agentes contendo níquel/cobalto. Em particular, embora agentes contraste MRI comercializados e GBCAs associados problemas toxicidade in vivo devido liberação íons Gd³⁺, agentes contraste MRI baseados IONPs têm maior segurança in vivo que GBCAs porque podem ser degradados a ferro, absorvidos, ou eliminados [26, 27].

Aplicar IONPs imagem molecular, moietas direcionamento extremamente importantes e podem ser químicos, carboidratos, proteínas, anticorpos, ou aptâmeros [25, 28, 29]. Entre estas moléculas, aptâmeros têm estrutura tridimensional estável ácido nucleico fita simples que tem alta afinidade ligação e especificidade moléculas específicas. Alta afinidade ligação aptâmeros causada por técnica desenvolvimento e evolução sistemática ligantes por enriquecimento exponencial (SELEX) [30]. SELEX usando bibliotecas muito grandes sequências oligonucleotídeos aleatórias (~10¹⁵) fornecidas por síntese química e triadas paralelas encontrar aptâmeros com alta afinidade ligação molécula alvo. Resultado SELEX, aptâmeros desenvolvidos com alta afinidade concentração picomolar geralmente enquanto outros biomoléculas variam micromolar a subnanomolar [31, 32]. No caso aptâmeros terceira geração recentemente desenvolvidos, também têm estabilidade in vitro e in vivo devido resistência melhorada contra DNase ou RNase usando ácidos nucleicos modificados [33, 34]. Por estas razões, aptâmeros emergem como moietas preferidas pesquisa imagem molecular [35].

Objetivo deste estudo desenvolvimento agente contraste T2 modificado aptâmero baseado nanocristais magnéticos (MNCs) com alta especificidade células cancerígenas superexpressando HER2. Alcançar objetivo, MNCs, com alta sensibilidade magnética, preparados por método decomposição térmica e aptâmero HER2-específico (K_d = 0,42 nM) usado. Agentes contraste sintetizados caracterizados analisando morfologia, propriedade magnetização, relaxividade magnética. Bem como, realizamos ensaios direcionamento in vitro e in vivo contra proteínas HER2 em modelo animal xenogênico tumoral implantado linhagem celular cancerígena HER2-expressando, respectivamente.

Métodos

Materiais

TWEEN® 80 (T80), 4-(dimetilamino)piridina, N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, trietilamina, diclorometano anidro, acetilacetonato ferro(III), 1,2-hexadecanodiol, ácido dodecanoico, dodecilamina, e éter benzílico comprados Sigma-Aldrich (EUA), e ácido 3-maleimidopropiônico (MPA) comprado TCI America (EUA). RPMI-1640, meio Eagle Dulbecco modificado, soro fetal bovino, solução antibiótico-antimicótico Gibco® comprados Life Technologies (EUA). NIH3T6.7 comprado American Tissue Type Culture (EUA). Água tratada dietilpirocarbonato (DEPC) comprada Biosesang Inc. (Coreia). Aptâmero anti-HER2 tioletado [Apt_HER2, sequência: 5'-6CC 6GG CA6 G66 CGA 6GG AGG CC6 66G A66 ACA GCC CAG A-3' (6: NapdU), 5'-SH modificação, 40-mer] comprado Aptamer Science Inc. (Coreia).

Síntese MNCs

Nanopartículas magnéticas óxido ferro monodispersas sintetizadas usando método decomposição térmica Sun [36]. Nanopartículas magnéticas chamadas MNCs devido precursores acetilacetonato ferro(III) e ácido oleico. Brevemente, mistura acetilacetonato ferro(III) (2 mmol), ácido oleico (6 mmol), 1-octadecen (6 mmol), 1,2-hexadecanodiol (10 mmol), éter benzílico (20 mL) carregada balão três gargalos e agitada mecanicamente. Remover oxigênio residual e água, mistura pré-aquecida 100 °C 30 min. Mistura pré-aquecida então aquecida 200 °C 2 h e refluxo 300 °C 30 min sob fluxo nitrogênio. Após reagentes resfriados temperatura ambiente removendo fonte calor, reagentes purificados com excesso álcool etílico. Centrifugação realizada triplicata separar produto resíduo não disperso. Produtos nanopartículas Fe₃O₄ redispersos 5 mL hexano. Produto final sintetizado repetindo procedimento acima com 100 mg Fe₃O₄ e precursores. Morfologias MNCs avaliadas microscópio eletrônico transmissão alta resolução (HR-TEM, JEM-2100, JEOL Ltd., Japão). Saturação magnetização avaliada magnetômetro amostra vibratória (VSM, MODEL-7300, Lakeshore, EUA) temperatura ambiente. Quantidade MNCs produto analisada medindo peso analisador termogravimétrico (SDT-Q600, TA Instrument), MNCs lavados até conteúdo Fe₃O₄ atingiu aproximadamente 80%.

Síntese Maleimidyl-TWEEN® 80

Preparação maleimidyl T80 (Tm80), 15,3 mmol MPA e 22,9 mmol N,N'-dicyclohexylcarbodiimide dissolvidos 10 mL diclorometano, respectivamente, subsequentemente misturados. Mistura então adicionada 20 mL diclorometano contendo 7,6 mmol T80, seguido adição 3,2 mL trietilamina mistura. Finalmente, 22,9 mmol 4-(dimetilamino) piridina dissolvido 10 mL diclorometano, todos reagentes misturados frasco 70 mL. Mistura final agitada ímã 48 h. Cor mistura mudou alperce para cor vinho tinto. Após reagir 48 h, uréia cristalizada removida filtração. Eliminar diclorometano, reação filtrada evaporação evaporador rotativo (N-1100, EYELA, Japão). Produto resultante suspenso água deionizada, reagentes não conjugados removidos diálise (Spectra/Por®, 1 kDa MWCO, Spectrum Laboratory Inc., EUA). Produto final preparado liofilização. Tm80 sintetizado confirmado comparação MPA e T80 usando espectrômetro UV-vis (UV-1800, Shimadzu, Japão), espectrômetro infravermelho transformada Fourier (FT-IR) (PerkinElmer, spectrum two), e espectrômetro ressonância magnética nuclear ¹H (NMR) (Bruker Biospin, Advance II, ver Arquivo adicional 1: Figura S1).

Preparação Maleimidyl MNCs

MNCs maleimidyl dispersíveis água (mWMNCs) preparados método nanoemulsão [37]. Brevemente, 100 mg Tm80 totalmente dissolvido 20 mL água deionizada, 4 mL n-hexano contendo 20 mg MNCs injetado rapidamente Tm80-dissolvido água com ultrassom (190 W) agitação (1200 rpm). Processo emulsão continuou 10 min banho gelo-resfriado. Solvente orgânico remanescente evaporado 12 h temperatura ambiente, produtos purificados diálise (Spectra/Por®, 3,5 kDa MWCO, Spectrum Laboratory Inc., EUA) remover excesso surfactante 3 dias. mWMNCs então concentrados filtro centrífugo (NMWL 3000, Amicon® Ultra, Merk Milipore Ltd., Alemanha) 1,25 mg_Fe/mL água tratada DEPC. MNCs envoltos T80 (WMNCs) também preparados mesmo método.

Preparação Apt_HER2-MNS

Antes conjugação entre mWMNCs e aptâmeros anti-HER2, etapa redução aptâmeros tiol-modificados realizada. Brevemente, 1 nmol aptâmero dissolvido 0,3 mL água deionizada, acetato trietilamina e solução 1,4-ditiotreitol adicionados concentração final 50 e 25 mM, respectivamente. Mistura agitada temperatura ambiente 1,5 h, purificada e dessalgada precipitação etanol. Preparar Apt_HER2-MNS, sonda MRI HER2-específica, peso molecular MNCs calculado teoricamente (ver Arquivo adicional 1: Figura S2) razão mistura mWMNCs e aptâmero designada 1:7. Portanto, 100 µg (Fe) mWMNCs (como Fe₃O₄, 45 pmol) dissolvido PBS (1 mL) 5 µg (0,35 nmol) aptâmero adicionado. Mistura agitada temperatura ambiente 5 min incubada 4 °C 2 h. Distribuição diâmetro hidrodinâmico Apt_HER2-MNS analisada analisador espalhamento laser dinâmico (ELS-Z, Otsuka Electronics, Japão). Confirmar habilidade Apt_HER2-MNS agente contraste MRI, análise relaxividade T2 (R2) realizada instrumento MRI clínico 1.5 T com bobina micro-47 superfície (Intera, Philips Medical System, Holanda) usando fantomas várias concentrações Apt_HER2-MNS. R2 Apt_HER2-MNS medido sequência Carr-Purcell-Meiboom-Gill (CPMG) temperatura ambiente: TR = 10 s, 32 ecos com 12 ms espaço eco par, número aquisições = 1, resolução ponto = 156 µm × 156 µm, espessura seção = 0,6 mm. R2 definido 1/T2 unidades s⁻¹.

Ensaio Afinidade Ligação Apt_HER2-MNS

Validação especificidade HER2 Apt_HER2-MNS, método ligação filtro nitrocelulose usado [38]. Apt_HER2 nu e Apt_HER2-MNS desfosforilados usando fosfatase alcalina (New England Biolabs, MA, EUA). Extremidade 5' ou 3' aptâmeros marcada quinase polinucleotídeo T4 e [³²P]-ATP (Amersham Pharmacia Biotech, NJ, EUA) [39]. Ensaios ligação conduzidos incubando aptâmeros ³²P-marcados concentração 10 pM com proteína HER2 concentrações variando 100 a 10 pM em tampão seleção (20 mM Tris·HCl, pH 7,5 a 4 °C, 6 mM NaCl, 5 mM 2-mercaptoetanol, 1 mM Na₃EDTA, 10% v/v glicerol) a 37 °C 30 min. Mistura aptâmeros ³²P-marcados e proteína HER2 filtrada coluna G-50 (GE Heathcare Life Science, UK) remover radioisótopos livres. Misturas filtradas desenvolvidas filme reutilizável, frações aptâmeros ligados proteína HER2 quantificadas fosforimager (Fuji FLA-5100 Image Analyzer, Tóquio, Japão). Eliminar efeito ligação inespecífica fundo aptâmero radiomarcado filtro nitrocelulose, dados brutos ligação corrigidos conduzindo experimento usando apenas aptâmeros ³²P-marcados.

MRI In Vivo

Todos experimentos animais conduzidos aprovação Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International. Exames MRI in vivo realizados usando modelo tumoral singênico camundongo, gerado implantação células NIH3T6.7 (1,0 × 10⁷ células) coxas fêmeas camundongos BALB/c nude 5 semanas. Após 2 semanas, tamanho tumor avaliado MRI. Quando tamanho tumor atingiu aproximadamente 500 mm³, 100 µg (5 mg/kg) Apt_HER2-MNS injetado veia cauda. Experimentos MRI in vivo realizados instrumento MRI clínico 3.0 T bobina pulso humano 8 canais. Para MRI T2-ponderado 3.0 T, parâmetros adotados: TR/TE = 1054/70 ms, número aquisições = 2, resolução ponto = 400 × 319 mm, espessura fatia = 1 mm TSE factor = 8. Experimentos controle realizados WMNCs mesmo método. Todas intensidades sinal T2 calculadas média aproximadamente cinco regiões interesse (ROIs) desenhadas imagens MRI T2-ponderadas cada modelo camundongo (n = 3), R2 (ou R2*) valor, inverso T2, usado análise intensidade sinal. Mudanças tempo intensidade sinal relativa normalizadas intensidade sinal inicial (pré-injeção). Análise histograma também conduzida intensidade sinal R2 voxel em ROI.

Análise Histológica

Coloração azul Prússia, pode detectar íon Fe tecidos tumorais, realizada confirmar direcionamento Apt_HER2-MNS câncer HER2-expressando após colheita tecido tumoral cada modelo tumoral após MRI in Vivo. Tecidos tumorais colhidos fixados solução formalina 10% 24 h embutidos parafina após desidratação concentrações etanol crescentes clarificação Histo-Clear® (National Diagnotics, EUA). Coloração azul Prússia realizada montando fatias tecido (espessura = 5 µm) lâminas vidro seguido desparafinação hidratação usando Histo-Clear® etanóis concentrados, respectivamente. Após, lâminas colocadas solução trabalho azul Prússia (10% ferrocianeto potássio 20% ácido clorídrico solução = 1:1) 1 h. Núcleos corados Nuclear Fast Red (Sigma Aldrich, EUA). Após lavar amostras tecido três vezes 30 min, adicionamos 2–3 gotas solução montagem lâminas cobrimos lâminas lamínulas. Seções tecido coradas observadas microscópio Olympus BX51 software Olyvia (Olympus, Japão).

Resultados e Discussão

Apt_HER2-MNS projetado agente direcionamento molécula única baseado IONPs para imagem molecular tumores HER2-expressando usando MRI. Portanto, Apt_HER2-MNS precisava alta especificidade molécula alvo e grande susceptibilidade magnética. Obter alta sensibilidade magnética primeiramente, MNCs, nanopartículas Fe₃O₄ monodispersas, sintetizadas usando decomposição térmica e método crescimento semente [36]. Procedimento experimental preparação aplicação in vivo Apt_HER2-MNS descrito Fig. 1. Primeiro, tamanho forma MNCs confirmados HR-TEM (Fig. 2a, b). Fig. 2c, tamanho médio MNCs medido seleção aleatória 130 MNCs imagem TEM, distribuição tamanho muito estreita (10,49 ± 1,74 nm) forma esférica observada. Propriedade superparamagnética MNCs também avaliada VSM, rendeu valor saturação magnetização MNCs 98,8 emu/g_Fe (Fig. 2d). Agente contraste T2, atualmente disponível injeção intravenosa, baseado óxidos ferro superparamagnéticos (SPIO) ou ultrapequenos superparamagnéticos (USPIO) [40]. SPIO ou USPIO também têm propriedades superparamagnéticas, mas valor saturação magnetização menor 70 emu/g_Fe [40,41,42,43]. Propriedade superparamagnética necessária usar IONPs agente contraste intravenoso porque causa IONPs ter propriedade magnética apenas quando em campo magnético, previne agregação IONPs. Além disso, maior valor saturação magnetização MNCs útil reduzir dose injeção que agentes contraste baseados SPIO ou USPIO.

Ilustração esquemática procedimento experimental preparação nanossensibilizador magnético modificado aptâmero (Apt_HER2-MNS) e avaliação habilidade imagem in vivo

Resultado caracterização morfológica magnética MNCs. a Imagem TEM. b Imagem TEM ampliada. c Distribuição tamanho medindo imagem TEM (contagem total 100). d Gráfico magnetização

Usar MNCs experimentos in vivo, WMNCs e mWMNCs preparados método nanoemulsão usando T80 ou Tm80, respectivamente. Características físico-químicas Tm80 preparado precursores MPA e T80 confirmadas absorbância, FT-IR, ¹H-NMR análise espectral (ver Arquivo adicional 1: Figura S1). Conforme publicado anteriormente [44], mWMNCs preparados método nanoemulsão usando Tm80 dispersos estavelmente água. Além, grupos maleimidyl mWMNCs facilmente conjugados molécula tem grupos tiol pH neutro conjugação não gera subprodutos. Aptâmero NapdU-modificado usado aumentar meia-vida in vivo, meia-vida 151 h soro humano (ver Arquivo adicional 1: Figura S3). Apt_HER2-MNS preparado conjugação entre mWMNCs Apt_HER2-SH, propriedades hidrodinâmicas Apt_HER2-MNS avaliadas espalhamento laser dinâmico análise relaxividade MR (Fig. 3). Diâmetros WMNCs e Apt_HER2-MNS 28,8 ± 7,2 e 34,1 ± 8,2 nm, respectivamente (Fig. 3a). Como Apt_HER2 consistia oligonucleotídeos 40-mer aproximadamente 5–10 nm comprimento, presença Apt_HER2 pode causar diferença diâmetro hidrodinâmico. Relaxividade WMNCs e Apt_HER2-MNS 265,7 e 257,2 mM⁻¹_Fe s⁻¹, respectivamente (Fig. 3b), avaliada confirmar sensibilidade magnética agente contraste MRI. No caso agentes contraste T2 baseados SPIO ou USPIO, aprovados FDA, quase sintetizados método co-precipitação. Por isso, cristalinidade diminuída, causou relaxividade baixa (abaixo 190 mM⁻¹ _Fe s⁻¹) sob campo magnético [40]. Usando MNCs este estudo, Apt_HER2-MNS teve 35 ~ 500%-aumentada relaxividade magnética que agentes contraste T2 baseados SPIO- ou USPIO.

Caracterização WMNCs e Apt_HER2-MNS uso agente contraste MRI in vivo. a diâmetro hidrodinâmico (n = 5, WMNCs 28,8 ± 7,2 nm, Apt_HER2-MNS 34,1 ± 8,2 nm). b Gráfico análise relaxividade (n = 3, WMNCs R² = 265,7 mM⁻¹ s⁻¹, R² = 0,99 e Apt_HER2-MNS R² = 257,2 mM⁻¹ s⁻¹, R² = 0,99)

Afinidade ligação Apt_HER2-MNS proteína HER2 avaliada ensaio ligação filtro (Fig. 4a), resultando valores K_d Apt_HER2-SH e Apt_HER2-MNS medidos 26,88 ± 8,24 e 0,57 ± 0,26 nM, respectivamente (Fig. 4b, c). Apt_HER2-OH tem altíssima especificidade proteínas HER2 com valor K_d 0,42 ± 0,05 nM, aproximadamente 10 vezes maior que 5 nM Herceptin® [45]. No entanto, afinidade ligação Apt_HER2 nu pode ser alterada conjugação químicos, moléculas, nanopartículas. Portanto, afinidade ligação Apt_HER2 proteínas HER2 avaliada após conjugação mWMNCs. Afinidade ligação Apt_HER2-SH HER2 reduzida presença grupo tiol em vez Apt_HER2 nu porque grupo tiol pode ligar outros resíduos tiol proteínas ou outros aptâmeros tiol-modificados. No entanto, afinidade ligação Apt_HER2-MNS medida similar Apt_HER2, resultado significa nem há suficiente Apt_HER2-SH livre pode interromper interação aptâmero proteína HER2 nem mWMNCs têm nenhuma ou pouca influência afinidade ligação aptâmeros.

Dados afinidade ligação aptâmero anti-HER2 (Apt_HER2-OH) aptâmero anti-HER2 tiolado (Apt_HER2-SH) e Apt_HER2-MNS proteínas HER2 medindo ensaio ligação filtro. a Ilustração esquemática processo ensaio ligação filtro aptâmeros. b Gráfico fração aptâmero ligado contra concentração HER2. c Gráfico valor K_d Apt_HER2-OH (0,42 ± 0,05 nM, R² = 0,99, p < 0,0001), Apt_HER2-SH (26,88 ± 8,24 nM, R² = 0,98, p < 0,0001), Apt_HER2-MNS (0,57 ± 0,26 nM, R² = 0,91, p = 0,001) calculado b. Barras erro representadas eixo y positivo apenas

Experimentos MRI in vivo realizados modelos tumorais singênicos camundongo avaliar habilidade Apt_HER2-MNS direcionar tumores HER2-superexpressando. Usando modelo tumoral gerado implantação células NIH3T6.7 coxa, experimento MRI conduzido pré-injeção 120 min após injeção WMNCs ou Apt_HER2-MNS (Fig. 5, ver também Arquivo adicional 1: Figura S4). Realce contraste T2 por agentes contraste baseados IONPs observado escurecimento imagem porque induzem efeito encurtamento T2 prótons ao redor. Portanto, análises intensidade sinal T2 ou T2* representados R2 ou R2*. R2, valor inverso T2, usado comparar intensidade sinal valor positivo. Caso WMNCs, maior intensidade sinal R2 observada 30 min após injeção WMNCs após diminuiu gradualmente (Fig. 5a, b). 120 min após injeção WMNCs, intensidade sinal T2 assemelhou estado pré-injeção. Taxa mudança valor médio intensidade sinal R2 menor 10%; difícil reconhecer MRI T2-ponderado olho nu. Estudo anterior demonstrou nanopartículas óxido ferro envoltas T80 acumulavam tecidos tumorais apesar ausência moietas direcionamento [46]. No entanto, estudo dose agente contraste 1,4 mg_Fe camundongo usada MRI T2-ponderado, 14 vezes maior dose usada este estudo. Significa WMNCs não poderiam mostrar eficácia realce contraste efetiva experimento dose 0,1 mg_Fe camundongo (5 mg_Fe/kg). Série temporal mudança intensidade sinal R2* também menor 10%, sem significância estatística. Em contraste, 120 min após injeção, Apt_HER2-MNS causou 130% maior intensidade sinal realce que antes injeção Apt_HER2-MNS apesar mesma dose injeção WMNCs (Fig. 5c, d). Dose injeção 2-30 vezes menor que outros estudos aptâmero-modificado nanopartículas magnéticas agente contraste [44, 47, 48]. Resultado indicou Apt_HER2-MNS tem maior habilidade direcionamento que WMNCs ou outro agente contraste aptâmero-modificado, também sugeriu alto efeito realce contraste Apt_HER2-MNS esperado apesar dose menor WMNCs. Realce contraste apareceu principalmente vasos periféricos centro tecido tumoral. Embora vasos periféricos escurecessem logo após injeção Apt_HER2-MNS, realce contraste centro lesão tumoral apareceu primeiro 60 min tendeu aumentar até 120 min.

Imagens MR in vivo modelo camundongo tumor HER2+ usando WMNCs (n = 3) ou Apt_HER2-MNS (n = 3). a Imagens MR T2- T2*-ponderadas pré- ou pós-injeção WMNCs. b Gráfico intensidade sinal relativa medido a. c Imagens MR T2- T2*-ponderadas pré- ou pós-injeção Apt_HER2-MNS. d Gráfico intensidade sinal relativa e e histograma intensidade região tumoral medido c. f Dados análise histológica obtidos após imagem MR. Barras erro representadas eixo y positivo apenas. Intensidades sinal relativa b, d, e medidas ROI linha vermelha sólida a, c, Arquivo adicional 1: Figura S4

Enfatizar mudança visível efeitos realce contraste antes após injeção Apt_HER2-MNS, análise histograma intensidade sinal R2 conduzida ROIs imagens MRI T2-ponderadas (Fig. 5e). Como sinal T2 aparente realce negativo MRI T2-ponderadas, representado R2. Após injeção Apt_HER2-MNS, centro histograma deslocado lado direito. Aproximadamente 10% aumento realce contraste observado quando diferença centro histogramas calculada.

Confirmar presença Apt_HER2-MNS tumor histologicamente, coloração azul Prússia realizada (Fig. 5f). Tecido corado azul Prússia, núcleo citoplasma corados rosa profundo ou claro, vários pontos azuis observados ao redor células tumorais. Assumimos tecidos tumorais corados azul se Apt_HER2-MNS direcionou tumor. Resultados coloração azul Prússia, pontos azuis observados tecidos tumorais, lâminas tecido Apt_HER2-MNS tinham aproximadamente 3 vezes mais pontos azuis que WMNCs. Coloração azul Prússia detecta íon Fe tecidos; usada confirmar acúmulo agente contraste baseado IONPs tecidos tumorais [44, 49, 50].

Conclusões

Concluímos Apt_HER2-MNS funciona agente contraste MRI HER2-direcionável in vivo por caracterização físico-química e experimentos MRI in vivo modelos tumorais camundongo HER2-expressando. Apt_HER2-MNS tem alta relaxividade especificidade HER2, demonstrou efeitos realce contraste marcados apesar dose administração menor outros agentes contraste T2, devido nanopartículas óxido ferro. Agente contraste esperado fornecer informações expressão câncer HER2 pacientes câncer utilizado monitorar pacientes HER2+ durante quimioterapia usando fármacos alvo HER2. Esperamos resultados trabalho ofereçam estratégia promissora diagnóstico câncer HER2-superexpresso e tratamento paciente.