Preparação e estudo farmacocinético de lipossomas de longa circulação de Daidzein

Resumo

Neste estudo, lipossomas de circulação longa da daidzeína (DLCL) foram preparados usando o método de ultra-som e hidratação por filme lipídico. As condições de preparação otimizadas pelo desenho ortogonal foram as seguintes:55 a 40 para a razão molar de fosfatidilcolina de soja (SPC) para colesterol, 1 a 10 para a razão de massa de daidzeína para lipídio total (SPC e colesterol) (w:w) , a concentração indicada de 5% DSPE-mPEG2000 (w:w), 50 ° C para a temperatura de hidratação e 24 min para o tempo ultrassônico. Nessas condições, a eficiência de encapsulação e carga de droga de DLCL foram 85,3 ± 3,6% e 8,2 ± 1,4%, respectivamente. Os tempos de liberação completa de DLCL no meio de pH 1,2 e pH 6,9 aumentaram quatro e duas vezes em relação aos medicamentos livres, respectivamente. Depois que os ratos foram administrados por via oral, uma dose única de daidzeína (30 mg / kg) e DLCL (contendo dose igual de daidzeína), respectivamente, e o MRT _{0− t} (tempo médio de residência, que é o tempo necessário para a eliminação de 63,2% da droga no corpo), t _1/2 (a meia-vida de eliminação, que é o tempo necessário para reduzir pela metade a concentração plasmática da droga na fase terminal), e AUC _{0− t} (a área sob a curva de concentração de droga no plasma-tempo, que representa a absorção total após uma única dose e reflete o grau de absorção da droga) de daidzeína no grupo DLCL, aumentou 1,6-, 1,8- e 2,5 vezes em comparação com aqueles em o grupo livre daidzein. Nossos resultados indicaram que a DLCL poderia não apenas reduzir o efeito de primeira passagem da daidzeína para promover sua absorção oral, mas também prolongar seu tempo médio de residência para atingir o efeito de liberação lenta.

Histórico

A daidzeína é um composto natural encontrado exclusivamente na soja e outras leguminosas e, estruturalmente, pertence a uma classe de compostos conhecida como isoflavonas. A atividade farmacológica foi relatada para daidzeína na prevenção e terapia para doenças cardiovasculares [1], alívio da menopausa [2], osteoporose [3], redução do risco de alguns cânceres relacionados a hormônios [4] e efeito anti-inflamatório [ 5]. Devido à estrutura química, a daidzeína tem solubilidade em água e solubilidade em lipídios muito pobres e foi absorvida principalmente no trato intestinal após administração oral e fácil de metabolizar formando conjugado de ácido glucurônico ou conjugado de ácido sulfúrico [6,7,8,9,10]. A fim de melhorar sua baixa biodisponibilidade, estudos recentes foram focados em seu novo sistema de entrega de drogas, como o complexo de daidzeína fosfolipídica [11], a micela automontada da daidzeína [12] e nanopartículas de ácido polilático [13].

O lipossoma é um sistema carreador de drogas eficaz, que pode encapsular drogas hidrofóbicas, drogas hidrofílicas e drogas que interagem com fosfolipídios [14, 15]. Devido à sua excelente biocompatibilidade, os lipossomas podem aumentar a permeabilidade intestinal, reduzir a degradação química e biológica e reduzir os efeitos colaterais não específicos das drogas [16]. No entanto, o uso de lipossomas convencionais não pode superar totalmente sua ligação com os componentes do soro e captação pelo sistema de fagócitos mononucleares (MPS) [17]. Para superar tais problemas, lipossomas de longa circulação, modificados com um hidrofílico ou um glicolipídeo como (polietilenoglicol) (PEG) ou mono-sialogangliosídeo (GM1), foram desenvolvidos nos últimos anos. A presença de PEG na superfície do transportador lipossomal de longa circulação demonstrou formar uma camada de película protetora hidrofílica, que pode evitar que o lipossoma interaja com uma variedade de componentes no soro e seja consumido pelo reconhecimento dos fagócitos [18]. Portanto, os lipossomas de longa circulação podem estender o tempo de circulação sanguínea reduzindo a captação de MPS e, assim, melhorar a biodisponibilidade dos medicamentos [19, 20]. Neste trabalho, o método de preparação do lipossoma de longa circulação da daidzeína (DLCL), bem como sua liberação in vitro e características farmacocinéticas em ratos, foram investigados. Os resultados fornecem base experimental para a aplicação clínica de DLCL.

Métodos

Materiais

A fosfatidilcolina de soja (SPC) foi adquirida da Lipoid GmbH (Alemanha). O colesterol e o DSPE-mPEG2000 foram adquiridos da AVT Pharmaceutical Co., Ltd. (Shanghai, China). Metanol e acetonitrila de grau HPLC foram adquiridos da TEDIA Company (EUA). O clorofórmio e o metanol (grau analítico) foram obtidos na Sinopharm Chemistry Reagent Co., Ltd. (Shanghai, China). A água foi purificada pelo sistema de purificação de água Milli-Q® ((Millipore, EUA). A daidzeína (≥ 98% em pureza) foi adquirida na Yuanye Biotechnology Co., Ltd. (Xangai, China). Apigenina (padrão interno, IS, ≥ 98% em pureza) foi adquirido da Delge Pharmaceutical Technology Co., Ltd. (Nanjing, China). O hidrato de ácido fosfotúngstico (grau analítico) foi adquirido da Macklin Co., Ltd. (Shanghai, China). Tween-80 e etil o acetato foi obtido na Sigma (Missouri, EUA). O ácido fórmico (grau MS) foi adquirido na Fischer (EUA).

Animais

Dez ratos machos Sprague-Dawley (200–210 g) foram adquiridos do centro de prevenção e controle de doenças da província de Hubei com o número de licença SCXK (E) 2017–0012. O experimento com animais foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade de Hubei e obedeceu ao guia de cuidado e uso de animais de laboratório.

Preparação de Nanolipossoma de Circulação Longa de Daidzeína (DLCL)

Tomando o tamanho de partícula e a eficiência de encapsulamento (EE) como índices de avaliação, o desenho ortogonal de quatro fatores e três níveis (Tabela 3) foi realizado para otimizar a melhor combinação da razão molar de CPS para colesterol (A), a razão de massa do droga (daidzeína) para o lipídio total (SPC e colesterol) (p / p) (B), temperatura de hidratação (C) e tempo ultrassônico (D) na condição de 5% de conteúdo de DSPE-mPEG2000 [21, 22] .

DLCL foi preparado pelo método de evaporação de película fina-sonicação descrito brevemente como se segue [21]:fosfatidilcolina de soja, colesterol, DSPE-mPEG2000 e daidzeína foram dissolvidos em um frasco de fundo redondo com 10 mL de clorofórmio-metanol (1:4, v / v) mistura. Sob as condições de vácuo e 40 ° C (banho-maria), a mistura foi seca para formar uma película fina no aparelho de evaporação rotativa (RE-2000A, Shanghai Yi-Rong Biochemical Instrument Factory, China), e então hidratada com 20 mL Água ultrapura por sonicação (80 w) por 24 min em banho de gelo. A suspensão lipossomal foi extrudada três vezes por filtração através de membrana microporosa de 0,45 μm e 0,22 μm, por sua vez. A solução DLCL preparada foi armazenada a 4 ° C. A preservação de longo prazo requer a adição de sacarose a 3% (usada como um lioprotetor) à suspensão de DLCL e a preservação por liofilização a -20 ° C.

Determinação de Daidzeína em DLCL por HPLC

A coluna era uma coluna analítica Phenomenex ODS (150 mm × 4,6 mm, 5 μm) conectada a uma coluna de guarda (30 mm × 10 mm, 3 μm) com a temperatura da coluna de 40 ° C. A fase móvel consistia em solução aquosa de acetato de amônio 10 mM (A) e metanol (B) com o gradiente de eluição como segue:0–3,0 min, 45% B a 80% B; 3,0–4,0 min, 80% B; 4,0–6,0 min, 80% B a 45% B. A taxa de fluxo foi de 1 mL / min. O comprimento de onda de detecção foi de 240 nm. O volume de injeção foi de 10 μL. O intervalo linear de daiazeína foi 0,313-50 μg / mL, e a equação de regressão foi y =35.461x + 1.802,4, R ² =0,9999. O tempo de retenção da daidzeína é de 4,30 min, e nenhuma interferência da formulação DLCL foi encontrada na determinação da daidzeína (Fig. 1). A precisão, reprodutibilidade, estabilidade e recuperação da amostra do método de análise foram rigorosamente investigadas e atenderam aos requisitos da análise quantitativa (Tabela 1).

Cromatogramas típicos de lipossomas em branco ( a ), substância de referência daidzeína ( b ) e amostra DLCL ( c )

Triagem de prescrição por teste ortogonal

Tomando o tamanho de partícula e a eficiência de encapsulamento (EE) como índices de avaliação, o desenho ortogonal de quatro fatores e três níveis foi realizado para otimizar a melhor combinação da razão molar de SPC para colesterol (A), a razão de massa da droga (daidzeína) para lipídio total (SPC e colesterol) (p / p) (B), temperatura de hidratação (C) e tempo ultrassônico (D) na condição de 5% de conteúdo de DSPE-mPEG2000 [21, 22].

Diâmetro e morfologia de DLCL

O tamanho de partícula e o potencial zeta da solução DLCL preparada foram medidos por um analisador de tamanho de partícula a laser (Zetasizer Nano90, Malven Instruments Limited, Worcestershire, UK) à temperatura ambiente, 230 V e 50 HZ. A solução de DLCL preparada foi diluída 10 vezes com água pura e, em seguida, retirada da borda da malha de cobre com uma pinça. Após secagem à temperatura ambiente e contra-coloração por solução aquosa de ácido fosfotúngstico (2%, p / v), a morfologia do DLCL completamente seco foi observada usando um microscópio eletrônico de transmissão de emissão de campo (JEM-2100 (HR), JEOL Ltd. , Tóquio, Japão) na aceleração 200 kV e transmissor LaB6.

EE e carregamento de drogas de DLCL

O EE e a carga de droga do DLCL preparado foram ensaiados pelo método de diálise declarado da seguinte forma:(1) 500 μL da solução de DLCL preparada foram adicionados a uma bolsa de diálise com o peso molecular de corte de 8.000-14.000 (BioSharp Sai-Guo Biotechnology Co., LTD), em seguida, amarrou as duas extremidades da bolsa de diálise firmemente e colocou a bolsa de diálise em 20 mL de água (meio de diálise). Após vibração com agitador por 12 h, 1 mL do meio de diálise foi retirado e centrifugado a 12000 rpm por 10 min para determinar a concentração de droga livre ( C ₁ ) no sobrenadante. (2) Quinhentos microlitros da solução de DLCL preparada e 2.000 μL de metanol foram misturados em vórtex por 15 min para destruir os lipossomas e, em seguida, centrifugados a 12.000 rpm por 10 min para determinar a concentração total da droga ( C ₀ ) no sobrenadante. (3) Dez mililitros da solução DLCL preparada ( V ₀ ) foi liofilizado para pesar a massa de pó sólido ( W ₀ ) (4) O EE e a carga de droga foram calculados de acordo com a fórmula indicada a seguir:
$$ \ mathrm {EE} \ left (\% \ right) =\ left ({C} _0 \ hbox {-} {C} _1 \ right) / {C} _0 \ times 100, \ kern1.5em \ mathrm {Drug} \ kern0.5em \ mathrm {carregando} \ left (\% \ right) ={C} _0 \ cdotp {V} _0 \ cdotp \ mathrm {EE} / {W} _0 \ times 100 $$

Liberação de droga in vitro

A liberação in vitro de DLCL e daidzeína livre foi determinada pelo método de diálise. O fluido gástrico simulado foi 0,1 mol / L de HCl (pH 1,2) contendo 0,5% de Tween-80, e o fluido intestinal simulado foi 25 mM de tampão PBS (pH 6,9) contendo 0,5% de Tween-80. 0,5 mL da solução DLCL preparada foi adicionado a um saco de diálise com interceptação de peso molecular de 8.000–14.000 e colocado em 20 mL dos dois meios de liberação, respectivamente. Os meios de teste de liberação foram agitados (100 rpm) continuamente a 37 ° C. Nos pontos de tempo indicados (0, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 96, 120 e 144 h), alíquotas da amostra (1 mL ) foram retirados do dialisado e, em seguida, suplementados com a mesma quantidade de meio de liberação fresco. Um miligrama por mililitro de daidzeína (dissolvido em DMSO) foi usado como controle e colocado respectivamente nos dois meios de liberação acima para o mesmo tratamento. A daidzeína foi medida em cada ponto de tempo e a taxa de liberação cumulativa foi calculada de acordo com a fórmula:
$$ \ mathrm {Cumulativo} \ kern0.5em \ mathrm {lançamento} \ kern0.5em \ mathrm {taxa} \ esquerda (\% \ direita) =\ esquerda [{V} _1 \ vezes \ esquerda ({C} _1 + {C} _2 + \ dots + {C} _ {i \ hbox {-} 1} \ right) + {V} _2 \ times {C} _i \ right] / \ left ({V} _ {\ mathrm {o }} \ times {C} _ {\ mathrm {o}} \ right) \ times 100 $$
Na fórmula, V ₁ foi a quantidade de amostragem em cada ponto de tempo, V ₂ foi o volume do meio de diálise, C ₁ ~ C _i foi a concentração de daidzeína medida em cada ponto de tempo, e V ₀ e C ₀ foram o volume e a concentração de DLCL adicionados à bolsa de diálise.

Farmacocinética de DLCL em ratos

Dez ratos machos Sprague-Dawley foram divididos aleatoriamente em dois grupos ( n =5). Um grupo foi o grupo daidzeína (suspensa em 0,5% de carboximetilcelulose de sódio) e outro grupo foi o grupo DLCL (dissolvido em água). As doses de daidzeína nos dois grupos foram de 30 mg / kg. Antes da administração oral, os ratos foram mantidos em jejum por 12 he livres para beber água. Após os ratos serem administrados por via intragástrica, o grupo daidzeína recebeu 0,5 mL de sangue do plexo venoso fundo de cada rato em 3 min, 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min, 60 min, 1,5 h, 2 h , 3 h, 4 h, 6 h, 8 h, 10 h, 12 h, 24 h e 36 h, respectivamente. Enquanto isso, o grupo DLCL foi retirado 0,5 mL de sangue de cada rato da mesma maneira em 1 min, 3 min, 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min, 60 min, 1,5 h, 2 h, 3 h , 4 h, 6 h, 8 h, 10 h, 12 h, 24 h e 36 h, respectivamente. A amostra de sangue foi colocada em um tubo de centrífuga heparinizado e centrifugada a 4000 rpm por 10 min, e o plasma foi retirado para armazenamento a -80 ° C. O conteúdo de daidzeína na amostra de plasma foi determinado pelo método LC-MS / MS estabelecido para obter sua curva de tempo de droga nos ratos testados. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados com modelo não compartimentado usando o software DAS3.0 (Professional Member of Chinese Pharmacology Society, Shanghai, China).

Determinação de daidazeína em plasma de rato por LC-MS / MS

As amostras de plasma de rato foram pré-tratadas da seguinte forma:plasma de rato (50 μL), metanol (10 μL), padrão interno (IS), apigenina dissolvida em metanol (10 μL, 500 ng / mL) e solução aquosa de ácido fórmico a 5% (100 μL ) foram misturados em um tubo de ensaio limpo de 1,5 mL. Seguindo brevemente a mistura em vórtice, 1,2 mL de acetato de etila foram adicionados à mistura. Após agitação à temperatura ambiente durante 5 min, a mistura foi centrifugada a 12.000 rpm durante 10 min. A fase orgânica superior resultante (1 mL) foi transferida para outro tubo de ensaio limpo de 1,5 mL, evaporado e redissolvido na fase móvel (100 mL). O sobrenadante obtido por centrifugação a 12.000 rpm por 10 min foi coletado para análise LC-MS / MS. As condições quantitativas de amostras de plasma de rato são descritas abaixo:GL Inertsustain C18 (100 mm × 2,1 mm, 3 μm) foi conectado a uma coluna de guarda de suporte de coluna Shim-pack (5,0 mm × 2,0 mm, 1,6 μm) a uma temperatura de coluna de 40 ° C; o gradiente de eluição com a taxa de fluxo de 0,2 mL / min foi realizada usando a fase móvel consistindo de água (A) -metanol (B) nas condições de 50% B a 80% B (0–2,00 min), 80% B (2,00–4,00 min), 80% B a 50% B (4,00–6,00 min) e 50% B (6,10–8,00 min). O volume de injeção foi de 10 μL. O modo de monitoramento de múltiplas reações de íons negativos (MRM) foi usado para detectar os pares de íons de daidzeína ( m / z 253,0 → 224,15) e IS ( m / z 269,00 → 117,05). As outras condições foram estabelecidas da seguinte forma:fonte de íons ESI, temperatura do bloco de aquecimento 400 ° C, temperatura de aquecimento do tubo DL 250 ° C, gás de atomização ( N ₂ ) fluxo de volume 3,0 L / min, gás de secagem ( N ₂ ) fluxo de volume de 15,0 L / min e voltagem de spray iônico - 4,5 V. Os tempos de retenção da daidzeína e do padrão interno (apigenina) foram 4,5 min e 5,4 min, respectivamente, e as substâncias endógenas no plasma não interferiram na determinação de daidzeína e padrão interno (Fig. 2). A metodologia quantitativa foi rigorosamente investigada e atendeu aos requisitos de análise quantitativa de amostras biológicas (Tabela 2).

HPLC de plasma branco ( a ), daidzeína + apigenina (padrões internos) + plasma em branco ( b ), e amostra de plasma ( c ) 1, daidzeína; 2, apigenina (IS)

Análise estatística

Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (DP). As comparações estatísticas foram feitas usando análise de variância unilateral (ANOVA), seguida pelo teste de Tukey. Os valores foram considerados estatisticamente significativos em p <0,05.

Resultados e discussão

Efeito dos processos de preparação nas características dos nanolipossomas

O desenho ortogonal do teste e os resultados do teste são mostrados na Tabela 3, e os resultados da análise de variância são mostrados na Tabela 4. A análise intuitiva (Tabela 3) mostrou que a ordem de influência de quatro fatores no tamanho da partícula foi a relação fármaco-lipídio> SPC- taxa de colesterol> temperatura de hidratação> tempo ultrassônico, que teve pouco efeito na eficiência de encapsulação. A análise de variância (Tabela 4) mostrou a relação fármaco-lípido; A proporção SPC-colesterol tem um efeito significativo no tamanho das partículas. As condições ideais de preparação para DLCL foram A ₁ B ₁ C ₂ D ₁ , a proporção de SPC para colesterol foi de 55:40, a proporção de fármaco para lipídios foi de 1:10, a temperatura de hidratação foi de 50 ° C e o tempo de ultrassom foi de 24 min.

Três lotes de DLCL foram preparados em paralelo de acordo com o processo otimizado acima. O EE foi de 85,3 ± 3,6% e a carga de fármaco foi de 8,2 ± 1,4%. O tamanho médio das partículas foi de 156,1 ± 3,0 nm com PDI de 0,294 ± 0,012 e potencial zeta de - 49 ± 0,6 mV. A distribuição de tamanho de partícula de DLCL foi mostrada na Fig. 3, o que indicou que sob as condições otimizadas do processo de preparação, o DLCL preparado tinha uma distribuição de tamanho de partícula estreita e uniforme. A forma e a estrutura das partículas de DLCL observadas por TEM eram redondas ou elípticas, e o tamanho era basicamente uniforme (Fig. 4).

Distribuição de tamanho de partícula de DLCL

Fotografia TEM de DLCL

A daidzeína é um medicamento típico com propriedades hidrofílicas e lipofílicas fracas. A combinação direcional da droga para a extremidade polar do fosfolipídeo pode torná-los ambos em um estado altamente disperso. As características dos cristais da droga são inibidas e a lipossolubilidade foi aumentada [11]. Foi relatado que na interação entre a daidzeína e a bicamada lipídica, cerca de 15% da daidzeína está localizada na região hidrofílica da membrana do lipossoma [23, 24] e o restante é distribuído na interface água / membrana [25]. De acordo com os resultados do TEM, a estrutura dupla da DLCL era óbvia e a inserção da daidzeína não afetou a estrutura dupla dos lipídios.

Efeito dos processos de preparação na liberação de drogas in vitro

Os resultados dos experimentos de liberação in vitro foram mostrados na Fig. 5. No meio de liberação do fluido gástrico simulado (0,1 mol / L de HCL contendo 0,5% de Tween-80), a taxa de liberação cumulativa de daidzeína foi de cerca de 85% em 1 h e liberação completa em 12 h; DLCL liberou 18% em 1 h, 60% em 12 h e 100% em 48 h. No meio de liberação de fluido intestinal simulado (tampão PBS 25 mM contendo 0,5% de Tween-80, pH 6,9), a taxa de liberação cumulativa de daidzeína foi de cerca de 73% em 1 h, 84% em 12 h e liberação completa em 24 h; DLCL liberou 3% em 1 h, 59% em 12 h e 100% em 48 h.

Liberação in vitro de DLCL e daidzeína livre em solução de cloridrato (pH 1,2) contendo 0,5% de Tween 80 ( a ) e tampão de fosfato (pH 6,9) contendo 0,5% de Tween 80 ( b ) (média ± DP, n =3)

Os resultados do experimento de liberação in vitro mostraram que DLCL foi significativamente de liberação lenta em meios de diálise com pH 1,2 e pH 6,9, e a taxa de liberação em meios de diálise com pH 1,2 foi mais rápida do que em meios de diálise com pH 6,9. Isso pode ser devido ao fato de que as estruturas da bicamada lipídica são vulneráveis ​​sob condições ácidas e têm estabilidade insuficiente.

Efeito dos processos de preparação na farmacocinética in vivo

As curvas de concentração plasmática média-tempo de daidzeína após a administração oral de uma dose única de daidzeína e DLCL foram mostradas na Fig. 6, e os principais parâmetros farmacocinéticos não compartimentais da daidzeína em ambos os grupos foram exibidos na Tabela 5. Os resultados mostraram que sob a isodose daidazeína (30 mg / kg) em ambos os grupos, a concentração plasmática de daidzeína no grupo DLCL foi sempre maior do que no grupo daidzeína. A AUC _{0− t} (a área sob a curva de concentração de droga no plasma-tempo, que representa a absorção total após uma única dose e reflete o grau de absorção da droga) da daidzeína no grupo DLCL foi de 1515,52 ± 532,40 μg / L * h, que foi 2,5 vezes maior que a de o grupo daidzein ( p <0,05). Além disso, o MRT _{0− t} (tempo médio de residência, que é o tempo necessário para a eliminação de 63,2% da droga no corpo) e t _1/2 (a meia-vida de eliminação, que é o tempo necessário para reduzir pela metade a concentração do fármaco no plasma da fase terminal) da daidzeína no grupo DLCL foi prolongada em 1,6 vezes e 1,8 vezes do que no grupo daidzeína, respectivamente ( p <0,05). Os resultados farmacocinéticos indicaram que a DLCL pode não apenas reduzir o efeito de primeira passagem da daidzeína para promover sua absorção oral, mas também prolongar seu tempo médio de residência para atingir o efeito de liberação lenta.

Curvas de concentração plasmática média-tempo de DLCL e daidzeína livre após administração oral de uma dose única de daidzeína (30 mg / kg) (média ± DP, n =5)

Conclusões

Foi relatado que os carreadores de nano-lipídios, incluindo o sistema de entrega de drogas auto-emulsionantes (SEDDS), nanopartículas de lipídios sólidos (SLN) e carreadores de lipídios nanoestruturados (NLC), podem efetivamente melhorar a solubilidade, permeabilidade, estabilidade gastrointestinal e biodisponibilidade oral de medicamentos. SEDDS é composto de óleo isotrópico anidro, emulsificante, emulsificante auxiliar, solubilizante e droga. Por meio da emulsificação de lipídios no trato gastrointestinal, pode aumentar a absorção da área de superfície e a permeabilidade de drogas e promover a entrada de drogas na circulação sistêmica. No entanto, SEDDS tem uma carga de droga baixa e é propenso a cristalização da droga e precipitação in vivo, e a correlação entre os resultados in vitro e in vivo é pobre [26, 27]. SLN é composto de droga, lipídio e surfactante. Com características únicas de estrutura de partícula e vantagens de liberação controlável, SLN pode melhorar significativamente o direcionamento e promover a absorção de células cancerosas quando usado para encapsular drogas anticâncer. No entanto, o SLN não é adequado para encapsular drogas hidrofílicas e drogas com carga catiônica [28]. NLC é a segunda geração de nanopartículas lipídicas formadas por uma mistura de lipídios líquidos e sólidos, com maior estabilidade do que SLN. Ele pode efetivamente encapsular moléculas hidrofóbicas e prolongar o tempo de residência dos medicamentos no corpo, mas seu custo de preparação é alto [29].

A fim de melhorar a baixa biodisponibilidade oral da daidzeína, estudos recentes foram focados em seu novo sistema de entrega de drogas, como nanocarreadores de lipídeos carregados com complexo daidzeína-fosfolipídio com 91,7 ± 1,5% de EE e 6,87 vezes de aumento de AUC [11], daidzeína sistema de nano-entrega auto-montado com 85,9 ± 2,7% de EE nove vezes de AUC aumentada [12] e nanopartículas de daidzeína-PLGA com 81,9% de EE e 5,57 vezes de AUC aumentada [13].

No presente trabalho, o EE e a carga de droga do DLCL preparado em condições otimizadas foram 85,3 ± 3,6% e 8,2 ± 1,4%, respectivamente. Os tempos de liberação completa in vitro de DLCL no meio de pH 1,2 e pH 6,9 aumentaram quatro e duas vezes em relação aos medicamentos livres, respectivamente. Depois que ratos foram administrados por via oral com uma dose única de daidzeína (30 mg / kg) e DLCL (contendo dose igual de daidzeína), o t _1/2 , MRT _{0− t} , e AUC _{0– t} de daidzeína no grupo DLCL aumentou 1,8-, 1,6- e 2,5 vezes em comparação com aqueles no grupo daidzeína, o que indicou que DLCL promoveu a absorção oral e prolongou o tempo médio de residência da daidzeína em ratos.

Disponibilidade de dados e materiais

Os autores declaram que os materiais, dados e protocolos associados estão prontamente disponíveis para os leitores sem qualificações indevidas nos acordos de transferência de material. Todos os dados gerados e analisados ​​durante este estudo estão incluídos neste artigo.

Abreviações

AUC:

Área sob a curva de tempo-concentração;

C _máximo :

Concentração máxima

Tubo DL:

Tubo dessolvente

DLCL:

Lipossomas de longa circulação da daidzeína

DSPE-mPEG2000:

Distearoil fosfoetanolamina-PEG2000

EE:

Eficiência de encapsulamento

ESI:

Ionização por electrospray

HPLC:

Cromatografia líquida de alta performance

IS:

Padrão interno

LC-MS / MS:

Cromatografia líquida-espectrometria de massa em tandem

m / z :

Razão massa-carga

MPS:

Sistema de fagócitos mononucleares

MRM:

Modo de monitoramento multi-reação

MRT:

Tempo médio de residência

MS:

Espectrogtáfia de massa

PBS:

Salina tamponada com fosfato

PDI:

Índice de polidispersidade

PEG:

Polietileno glicol

RSD:

Derivação de padrão relativo;

SD:

Desvio padrão

SEM:

Erro padrão da média

SPC:

Fosfatidilcolina

t _1/2 :

Meia-vida de eliminação

TEM:

Microscopia eletrônica de transmissão

T _máximo :

O tempo de concentração de pico

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