Nanocarriers à base de nucleosídeo-lipídio para entrega de sorafenibe

Resumo

Embora a aplicação de sorafenibe, um pequeno inibidor das proteínas quinases da tirosina, para tratamentos de câncer permaneça uma opção mundial na quimioterapia, novas estratégias são necessárias para abordar a baixa solubilidade em água (<5 μM), toxicidade e problemas de efeitos colaterais dessa droga. Nesse contexto, o uso de nanocarreadores é atualmente investigado a fim de superar essas desvantagens. Nesta contribuição, relatamos um novo tipo de nanopartículas à base de sorafenibe estabilizadas por nucleosídeos-lipídeos híbridos. As nanopartículas lipídicas sólidas (SLNs) apresentaram valores de potencial zeta negativo ou positivo dependendo da carga do nucleosídeo-lipídio. A microscopia eletrônica de transmissão de SLNs carregados com sorafenibe revelou nanopartículas paralelepipédicas de cerca de 200 nm. Estudos biológicos realizados em quatro linhagens celulares diferentes, incluindo câncer de fígado e de mama, revelaram atividades anticâncer aumentadas de SLNs à base de sorafenibe em comparação com a droga livre. É importante ressaltar que as imagens de microscopia de fase de contraste registradas após a incubação de células cancerosas na presença de SLNs em alta concentração em sorafenibe (> 80 μM) revelaram uma morte total de células cancerosas em todos os casos. Esses resultados destacam o potencial dos SLNs baseados em lipídios-nucleosídeos como sistemas de distribuição de drogas.

Histórico

Sorafenibe comercializado sob o nome de Nexavar ™ é um inibidor da quinase de drogas hidrofóbicas [1] aprovado para o tratamento de diferentes cânceres humanos, incluindo carcinoma de células renais avançado (RCC) [2], carcinoma hepatocelular (HCC) [3] e tireóide avançado carcinoma. Sorafenibe tem vários alvos de proteína quinase conhecidos, incluindo receptores transmembrana e tirosina intracelular e serina-treonina quinases, e também foi mostrado para induzir apoptose. Em termos de mecanismo de ação, é relatado que o sorafenibe inibe o crescimento do tumor por meio de múltiplos alvos, agindo diretamente no tumor e / ou na angiogênese do tumor (por meio da inibição da sinalização de VEGFR e PDGFR) [4, 5]. Sua eficácia na inibição do crescimento de células malignas foi demonstrada em muitos tipos de câncer histológico, como melanoma [6], tireóide [7], pancreático [5], carcinoma hepatocelular e leucemia [8], por exemplo. No entanto, a baixa solubilidade em água, a toxicidade e os efeitos colaterais limitam o uso de sorafenibe em muitas aplicações clínicas. Para resolver esses problemas, várias formulações de sorafenibe estão atualmente sob investigação [9, 10], incluindo nanopartículas cristalinas líquidas [11], nanoemulsão [12], nanopartículas de silício poroso modificadas com ciclodextrina [13], nanocompósitos eluidores de drogas [14], polieletrólito à base de nanopartículas [15], ou nanopartículas automontadas de curcumina [16]. No entanto, nanopartículas lipídicas (LNs) carregadas com sorafenibe foram pouco investigadas [17, 18].

Aqui, relatamos o primeiro exemplo de nanopartículas de lipídios sólidos (SLNs) à base de sorafenibe [19] estabilizadas por nucleosídeos-lipídios [20,21,22]. Estudos cromatográficos realizados em nucleolipídeos carregados positivamente e negativamente (DOTAU e diC ₁₆ dT, respectivamente) indicam que esses anfifílicos possuem a estabilidade e pureza solicitadas para seu uso dentro do quadro de aplicações de entrega de drogas [23, 24]. Um procedimento simples de nanoprecipitação permite a formação de SLNs com características positivas (SLN ⁺ ) ou cargas negativas (SLN ^- ) (Figura 1). É importante notar que todos os SLNs investigados aumentaram o efeito citotóxico do sorafenibe em diferentes carcinoma humano, demonstrando que os SLNs podem superar as limitações do sorafenibe em termos de solubilidade aquosa e atividades anticâncer.

Esquema de formulação de SLNs. Estruturas químicas de um nucleotídeo-lipídeo aniônico, a timidina 3 ′ - (1,2-dipalmitoil- sn -glicero-3-fosfato) (diC ₁₆ dT), um lipídeo-nucleosídeo catiônico DOTAU (2 ′, 3′-dioleil-5′-desoxi-5′-trimetil-amônio-uridina) e sorafenibe usado neste estudo (à esquerda). Desenho esquemático de SLNs com formas paralelepipédicas obtidas após nanoprecipitação de um nucleolipídeo (seja diC ₁₆ dT ou DOTAU, levando a SLN ^- e SLN ⁺ , respectivamente) com sorafenibe (direita). A representação esquemática é adaptada da imagem de microscopia eletrônica de transmissão (TEM) mostrando nanopartículas carregadas com DOTAU sorafenibe (inserção, barra 500 nm)

Métodos

Produtos Químicos e Reagentes

Metanol (MeOH), ácido fórmico (FA) e formato de amônio (AFNH ₄ ) foram adquiridos na VWR Chemicals (França) e eram todos de grau HPLC (cromatografia líquida de alto desempenho). Água grau de pureza para HPLC (resistividade mínima de 18,2 MΩ) foi produzida internamente pelo sistema ELGA Millipore (França). DOTAU (Número CAS:868226-06-6) e diC ₁₆ dT (número CAS:1160002-70-9) foram sintetizados no laboratório de acordo com o protocolo relatado nas referências [23,24,25]. Sorafenib, 4- [4 - [[4-cloro-3- (trifluorometil) fenil] carbamo-lamino] fenoxi] - N -metil-piridina-2-carboxamida (número CAS:284461-73-0) foi adquirido na SynVec http://synvec.fr (Ref # D114250414).

Estudos de cromatografia

Um método UHPLC de fase reversa (cromatografia líquida de ultra alto desempenho) foi desenvolvido para nucleolipídeos (DOTAU e diC ₁₆ dT) e quantificação de sorafenibe em SLNs. Antes da injeção em HPLC, soluções aquosas de nanopartículas foram diluídas com etanol pelos fatores 5 e 10, para quantificar nucleolipídios e Sorafenibe, respectivamente.

Foi utilizado um sistema cromatográfico UHPLC UltiMate 3000 da Dionex-Thermo Scientific (EUA), composto por uma bomba com sistema de válvula quaternária para seleção de coluna, um auto-amostrador termostato e um compartimento de coluna termostatizado. A separação foi realizada com a coluna Syncronis C18 50 × 2,1 mm, 1,7 μm. A fase móvel consistia em 70/30 MeOH / acetato de amônio 25 mM (pH =7,4) (A) e acetato de amônio 26,5 mM em MeOH (pH =7,9) (B). Foi usada uma taxa de fluxo de 0,2 mL / min e o perfil do gradiente foi de 0–2 min, 0–100% B; 2–20 min, 100% B. A temperatura da coluna foi fixada em 25 ° C. A detecção foi realizada a 267 nm para sorafenib e diC ₁₆ dT e 257 nm para DOTAU. O volume injetado foi de 1 μL levando a limites de quantificação de 0,6 ng para sorafenibe e 15 ng para ambos os nucleolipídeos e DOTAU e diC ₁₆ dT.

Curvas padrão para sorafenibe, DOTAU e diC ₁₆ dT em etanol são mostrados no arquivo adicional 1:Figuras SI1, SI2 e SI3, respectivamente.

Preparação de Nanopartículas de Sorafenibe

Dez miligramas de sorafenib foram dissolvidos em 1 mL de etanol e 10 mg de NLs (diC ₁₆ dT ou DOTAU) foi solubilizado em 1 mL de etanol. Cem microlitros de NLs, 100 μL de soluções de sorafenibe e 800 μL de etanol foram misturados em temperatura ambiente e adicionados gota a gota em 10 mL de água destilada sob agitação magnética. A solução foi colocada em banho ultrassônico por 90 min a 25 ° C. O etanol foi removido sob vácuo a 30 ° C e o volume foi ajustado para 1 mL. Esta solução foi sonicada duas vezes usando uma sonda ultrassônica de 6 mm (Vibracell 75186) por 10 min a 100% da amplitude com pulso de 2 seg a cada 5 seg. Um mililitro foi dialisado contra 30 mL de água destilada por 3 × 15 min. Este volume é ajustado para 2 mL e conservado para quantificação de caracterização e estudos de estabilidade. Além disso, experimentos de controle foram realizados com o mesmo protocolo na ausência de nucleolipídeos.

Microscopia Eletrônica de Transmissão (TEM e EDX)

As nanopartículas foram visualizadas por microscopia de coloração negativa. Dez microlitros de nanopartículas foram transferidos para uma grade de cobre revestida com carbono por 10 min. A amostra foi então seca e corada com 2,5% ( w / w ) de acetato de uranila em água por 2 min. Os espécimes foram observados com um microscópio eletrônico Hitachi H 7650. A espectroscopia de energia dispersiva de raios-X foi realizada usando um microscópio eletrônico de transmissão TECNAI acoplado ao Quantax-X-Flash SVE 6.

Tamanho de partícula e determinação Zeta

A zeta e o tamanho das partículas foram determinados usando um Zetasizer NanoZS, Malvern. Os experimentos foram realizados com 40 μL das nanopartículas diluídas em 400 μL de água, e as medidas foram realizadas a 25 ° C.

Análise de citotoxicidade

HuH7 e HepG2 foram cultivados em monocamada em DMEM-Glutamax suplementado com soro fetal de vitela a 10%. MDA-MB-134 e T-47D foram cultivados em monocamada em RPMI suplementado com 10% de soro fetal de bezerro (apenas para T-47D, AA 1X não essencial, glicose 0,45%, insulina 10 mg L ⁻¹ e piruvato de sódio 1X). Todos os reagentes de cultura eram da Invitrogen. 10 ⁴ células / poço em 90 μL de meio de cultura completo foram semeados em uma placa de 96 poços e incubados por 24 h a 37 ° C e 5% de CO ₂ , antes de adicionar 10 μL de SLN ou sorafenib no meio de cultura. Sorafenib (número CAS:284461-73-0) foi dissolvido em meio de cultura com DMSO a 0,1%. Observe que, nessas condições, a concentração máxima de sorafenibe sem precipitação foi de 5 μM, enquanto para SLNs carregados com Sorafenibe, a concentração máxima testada foi de 120 μM sem DMSO. Após 4 dias de incubação, a viabilidade celular foi avaliada com o ensaio de proliferação baseado em formazan (kit CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega), adicionando 20 μL / poço de solução reagente. Após uma incubação de 30 minutos a 37 ° C, 5% CO ₂ , a absorbância de cada poço foi medida em um comprimento de onda de 492 nm usando um espectrofotômetro Berthold. Os resultados são expressos como a porcentagem de \ (\ frac {{\ mathrm {OD}} _ {492} \ \ mathrm {de} \ \ mathrm {tratado} \ \ mathrm {células} - {\ mathrm {OD}} _ {492} \ \ mathrm {de} \ \ mathrm {em branco}} {\ {\ mathrm {OD}} _ {492} \ mathrm {de} \ \ mathrm {não tratada} \ \ mathrm {células} - {\ mathrm {OD}} _ {492} \ \ mathrm {de} \ \ mathrm {em branco}} \).

Estudos de viabilidade celular

HuH7 foi cultivado conforme descrito anteriormente na seção “Análise de citotoxicidade”. A viabilidade celular foi realizada após 4 dias de incubação com SLN ⁺ carregado com sorafenibe em diferentes concentrações (0, 1, 5, 10, 25, 50 e 100 μM) usando ensaio de viabilidade de células vivas / mortas (Invitrogen). Resumidamente, o meio de cultura foi removido e as células aderentes foram lavadas uma vez com solução salina balanceada de Hanks (HBSS). Duzentos microlitros de HBSS contendo 2 μM de éster acetoximetílico de calceína e 4 μM de homodímero-1 de etídio foram adicionados a cada poço e incubados por 45 min a 37 ° C e 5% de CO ₂ . Após a coloração, as células foram lavadas uma vez com HBSS e fotografadas microscopicamente em um microscópio de fluorescência invertida. A porcentagem de células mortas foi avaliada por análise de classificação de células ativadas por fluorescência (FACS). Após a coloração com 4 μM de solução de homodímero de etídio-1, as células foram tratadas com tripsina e lavadas duas vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS) por centrifugação a 1000 rpm por 5 min. Os dados foram adquiridos no citômetro de fluxo LSRFortessa da Becton Dickinson, e os resultados foram analisados ​​usando o software DIVA. Uma amostra de células mortas foi preparada usando 70% de metanol e usada como controle.

Resultados e discussão

Síntese e caracterização de SLNs

A não toxicidade e as propriedades de automontagem dos nucleolipídeos os tornam adjuvantes anfifílicos ideais para a encapsulação de drogas hidrofóbicas, como o sorafenibe. Neste estudo, um procedimento simples de nanoprecipitação foi desenvolvido para abordar as propriedades de baixa solubilidade em água do sorafenibe e aumentar sua atividade anticâncer, o que limita em muitos casos seu uso clínico. Em relação à solubilidade em água, hipotetizamos que o caráter hidrofóbico, os heterociclos e as funções de ligação de hidrogênio do sorafenibe favoreceriam as interações com nucleolipídeos e a formação de nanoobjetos. Além disso, esperava-se que os SLNs carregados com sorafenibe aumentassem as atividades antitumorais, aumentando a captação celular de sorafenibe. De fato, em um de nosso estudo anterior realizado com nanopartículas de cisplatina, demonstramos que o aumento das atividades antitumorais da cisplatina foi devido a um aumento da quantidade de droga internalizada nas células cancerosas [23] [1]. Nosso processo de nanoprecipitação envolve três etapas:(i) a solubilização de sorafenibe em etanol a 40 ° C (10 mg / mL de sorafenibe, 100 μL) e adição de um equivalente de nucleolipídeo (seja um nucleotídeo-lipídeo aniônico, o diC ₁₆ -3′-dT [timidina 3 ′ - (1,2-dipalmitoil- sn -glicero-3-fosfato)] ou um nucleosídeo-lipídeo catiônico DOTAU [23] [2 ′, 3′-dioleil- 5 ′ -desoxi-5′-trimetil-amônio-uridina], 100 μL de uma solução a 10 mg / mL em etanol; (ii) 1 mL da solução de etanol é adicionado gota a gota à temperatura ambiente a 10 mL de água destilada; e (iii) a suspensão resultante foi evaporada para remover o excesso de etanol e sonicada.

Estudos Cromatográficos

Para avaliar as capacidades de carga de drogas das novas formulações, um método UHPLC de fase reversa foi desenvolvido. Usando este método de HPLC, a separação simultânea de sorafenibe e nucleolipídios foi alcançada em 12 min, permitindo a quantização individual de compostos em SLNs (arquivo adicional 1:Figura SI1–4).

Taxas de carregamento (razões de massa de sorafenibe / nucleolipídeos em nanopartículas) de 50 e 80% e rendimentos de encapsulação de sorafenibe em torno de 55 e 75% foram obtidos para formulações compostas de sorafenibe / DOTAU (SLN ⁺ ) e sorafenib / diC ₁₆ dT (SLN ^- ), respectivamente. Durante o experimento de controle realizado na ausência de nucleolipídeo, cerca de 90% do sorafenibe foi perdido durante as diferentes etapas da formulação, provavelmente devido à baixa solubilidade do sorafenibe em água. Este resultado demonstra que os nucleolipídios são necessários para solubilizar o sorafenibe e estabilizar os SLNs.

Estudos Físico-Químicos

Experimentos de espalhamento dinâmico de luz (DLS) foram realizados para caracterizar a formação de SLNs. Nucleolipídeos negativos e positivos (diC ₁₆ dT e DOTAU) formam nanopartículas não esféricas semelhantes com formas paralelepipédicas em solução aquosa com uma monodispersidade (índice de polidispersidade, PDI =0,202 e 0,289; tamanho =335,2 e 304,4 nm, respectivamente, Fig. 2 e Arquivo adicional 1:Figura SI7). Como esperado, os potenciais zeta de objetos baseados em SLN dependem das cabeças polares dos nucleolipídeos ( ζ =+ 59,1 e - 54,9 mV para SLN ⁺ e SLN ^- , consulte o arquivo adicional 1:Figura SI10). A presença de sorafenibe no NP foi validada por imagens TEM e aquisições EDX de um SLN− foram realizadas com aquisições EDX. A Fig. 2e, f mostra os pontos I e II. O ponto I na Fig. 2f exibe a emissão do átomo de cloro (ponto I, Fig. 2e, f) indicando a presença do sorafenib (ver estrutura química Fig. 2f). Observe que o cloro está presente apenas no ponto I e não no ponto II (Fig. 2f).

Caracterização de SLNs. Imagens de microscopia eletrônica de transmissão (TEM) mostrando a morfologia das nanopartículas de sorafenibe com DOTAU ( a ) e inserir ( b ) Exemplo de um SLN baseado em DOTAU apresentando um tamanho de 327 por 172 nm (setas), que confirma um tamanho médio de 304 nm medido por DLS ( d ) c Exemplo de imagem TEM mostrando diC ₁₆ dT-SLNs (setas 330 por 500 nm, respectivamente). ( e ) Imagem TEM de um SLN-. Os pontos I e II são os locais onde as aquisições de EDX foram realizadas. ( f ) Espectros de EDX nas posições I e II. A linha tracejada enfatizou a emissão do átomo de cloro, que está presente apenas em I. A estrutura química da molécula de sorafenibe também é apresentada. Ambos os espectros foram normalizados com emissão de átomo de Cu a 8 keV (devido à grade de Cu TEM)

É importante ressaltar que em experimentos de controle, a nanopreciptação de sorafenibe na ausência de nucleolipídeo não deu origem a nenhum nanoobjeto, demonstrando que os nucleolipídeos permitem a formação e estabilização dos SLNs.

Estudos de estabilidade

Estabilidades coloidais de SLN ⁺ e SLN ^- foram medidos por DLS e potencial zeta em duas temperaturas (Fig. 3a e arquivo adicional 1:Figura SI10). No caso de diC ₁₆ Formulações baseadas em dT, o tamanho de SLN ^- não foi modificado após 30 dias a 4 e 37 ° C, indicando uma alta estabilidade dessas nanopartículas (arquivo adicional 1:Figura SI9). Tal estabilidade pode ser explicada pela natureza das interações (envolvendo ligações H, π - π empilhamento, carga / interação de carga) ocorrendo entre o diC ₁₆ dT e sorafenibe. No entanto, para formulações baseadas em DOTAU, SLN ⁺ permaneceram estáveis ​​apenas a 4 ° C por 30 dias, conforme revelado por estudos DLS (Fig. 3a), enquanto que a 37 ° C, foi observado um aumento do tamanho e do PDI (Fig. 3a). Esta instabilidade relativa observada a 37 ° C no caso de SLN ⁺ pode ser explicada por interações coulômbicas repulsivas que ocorrem entre as cargas positivas de sorafenibe e DOTAU. Curiosamente, os estudos de estabilidade coloidal indicam que é possível modular a estabilidade, daí a entrega de sorafenibe dos SLNs para o ambiente fisiológico, dependendo do nucleolipídeo usado para a estabilização dos SLNs. A modulação de estabilidade pode ser atrativa dependendo da cinética de liberação necessária.

Estudos de estabilidade de SLNs. Estabilidade coloidal de SLN ⁺ ( a ) e estabilidade química de sorafenibe e DOTAU em SLN ⁺ versus tempo a 4 e 37 ° C ( b ) PDI, índice de polidispersidade

Em paralelo à estabilidade coloidal, a estabilidade química de sorafenib, DOTAU e diC ₁₆ O dT nas formulações baseadas em SLN foi investigado como uma função do tempo a 4 e 37 ° C usando um novo método cromatográfico (consulte o arquivo adicional 1:Figura SI4). Estudos cinéticos em ambas as temperaturas são mostrados na Fig. 3b e arquivo adicional 1:SI5 para DOTAU-SLNs e diC ₁₆ dT-SLNs, respectivamente. Os resultados mostram que sorafenib e diC ₁₆ As moléculas de dT nas formulações permanecem estáveis ​​por pelo menos 1 mês, indicando uma estabilidade química de longo prazo em ambas as temperaturas no caso de SLN ^- . No entanto, uma diminuição do DOTAU ao longo do tempo foi observada no SLN ⁺ formulações. Primeiro, a 4 ° C, foram medidas perdas de cerca de 12% ao longo de 7 dias e 20% ao longo de 30 dias. Ao aumentar a temperatura, a estabilidade do DOTAU diminuiu com uma perda de 55% ao longo de 7 dias e até 95% ao longo de 30 dias a 37 ° C. Essas diferenças na estabilidade química entre os nucleolipídeos já foram evidenciadas durante os estudos de estabilidade anteriores (consulte o arquivo adicional 1:Figura SI6).

Estudos Biológicos

A citotoxicidade do SLN foi avaliada pelas atividades de metabolismo e morfologias das células. O ensaio de MTT permitiu comparar sorafenibe livre (em 0,1% de DMSO) e SLNs carregados com a droga (Fig. 4) em quatro linhas celulares, incluindo dois hepatocarcinomas (HuH7 e HepG2) e dois cânceres luminais de mama (MDA-MB-134 e T- 47D). Primeiro, em concentrações próximas à solubilidade máxima de sorafenibe livre (5 μM de sorafenibe em 0,1% de DMSO, 2,8 μM para sorafenibe / DOTAU e 4 μM para sorafenibe / diC ₁₆ nanopartículas dT), ambos os SLNs inibiram a viabilidade celular melhor do que o sorafenibe livre. Conforme mostrado na Fig. 4b, um estudo de viabilidade celular realizado em células MDA-MB-134 indicou que a atividade do sorafenibe livre é limitada por sua solubilidade em água (100% da viabilidade celular em [sorafenibe] =5 μM), enquanto IC ₅₀ valores de 15 e 50 μM foram observados para SLN ⁺ e SLN ^- , respectivamente (Fig. 4b). Em um estudo FACS realizado no HuH7, um IC ₅₀ de aproximadamente 50 μM foi obtido (Arquivo Adicional 1:Figuras SI12 e SI13). Imagens de microscopia de contraste de fase mostram de fato uma densidade reduzida das camadas de células tratadas com SLN ^- e SLN ⁺ em comparação com células não tratadas ou tratadas com sorafenibe sem alteração da morfologia celular (arquivo adicional 1:Figura SI11). Em segundo lugar, experimentos semelhantes foram realizados em concentrações mais altas de SLNs ([sorafenib] =120 e a 84 μM para SLN ^- e SLN ⁺ , respectivamente) e comparado ao sorafenibe livre em seu limite de solubilidade (concentração de 5 μM). Nessas condições, ambos os SLNs exibem um forte efeito citotóxico nas quatro linhas de células cancerosas, conforme mostrado na Fig. 5. Como revelado nas imagens de microscopia de contraste de fase, restos celulares foram observados para ambos SLN ^- (Fig. 5C1–4) e SLN ⁺ (Fig. 5D1–4) atestando a morte celular, enquanto as células permanecem vivas no caso do sorafenibe livre (Fig. 5B1–4). É importante notar que fortes efeitos citotóxicos para ambos os SLNs foram observados no caso de células luminais de câncer de mama B (Fig. 5C1–2 e D1–2). Esse efeito antitumoral, que não foi relatado antes, abre uma nova aplicação terapêutica possível do sorafenibe graças aos SLNs.

Efeito da citotoxicidade do sorafenibe ou SLNs. a ) Comparação da citotoxicidade com Sorafenibe livre ou SLNs de Sorafenibe em 4 linhas de células (2 câncer de mama B luminal e 2 hepatocarcinomas) após quantificação com ensaio MTS em 3 poços a 5 μM de Sorafenibe livre, 2,8 μM de NPs Sorafenibe / DOTAU (SLN + ) e 4 μM de NPs Sorafenib / diC16dT (SLN-). b ) Ensaio de viabilidade celular (células MDA-MB-134) na presença de sorafenibe livre (solubilidade limitada), SLN + (cinza) ou SLN- (preto)

Comparação das morfologias das células entre controle, sorafenibe livre ou SLNs. Imagens de microscopia de contraste de fase mostrando citotoxicidade em diferentes condições em quatro linhas de células de carcinoma humano (os hepatocarcinomas, HuH7, HepG2 e o carcinoma luminal de mama MDA-MB-134, T-47D). A) Na ausência de sorafenibe (experimentos de controle, A1 - A4 para linhas celulares MDA-MB-134, T-47D, HuH7, HepG2, respectivamente). B) As células foram incubadas por 4 dias na presença de 5 μM de sorafenib livre. C e D) células incubadas na presença de SLN ^- e SLN ⁺ a 84 e 120 μM na concentração de sorafenib, respectivamente

Conclusão

Nós relatamos uma nova abordagem baseada em nucleolipídios, permitindo o encapsulamento e entrega eficiente de sorafenibe. Nossas investigações demonstram a formação de dois tipos de nanopartículas lipídicas sólidas (SLNs) altamente carregadas com sorafenibe. Esses SLNs, que mostram valores de potenciais zeta negativos ou positivos, apresentam formas paralelepipédicas. Conforme revelado pelos estudos DLS e HPLC, a estabilidade dos SLNs pode ser modulada dependendo do nucleolipídeo usado. É importante ressaltar que ambos SLN ⁺ e SLN ^- as formulações são capazes de aumentar drasticamente a solubilidade do sorafenib em água (concentrações superiores a 120 μM). Tais SLNs exibem melhores atividades antitumorais em quatro linhas de células cancerígenas (câncer de fígado e mama) em comparação com sorafenib livre, que é limitado devido à sua falta de solubilidade em água. Imagens de microscopia de fase de contraste, registradas nas quatro linhas de células cancerosas, exibem uma mortalidade celular drástica quando incubadas com 120 μM de SLN ^- ou 84 μM de SLN ⁺ . Assim, esse medicamento poderia ser utilizado como a nova opção terapêutica no caso dos cânceres de fígado (uso de sorafenibe em quimioterapia intra-arterial, por exemplo) ou de mama. Até onde sabemos, este relatório é o primeiro exemplo de um estudo usando sorafenibe contra cânceres de mama B luminais, demonstrando a utilidade da abordagem SLN. Ao todo, os resultados relatados nesta contribuição destacam o potencial dos SLNs baseados em lipídios-nucleosídeos como sistemas de entrega de drogas.

Abreviações

AFNH ₄ :

Formato de amônio

DLS:

Espalhamento de luz dinâmico

FA:

Ácido fórmico

HCC:

Carcinoma hepatocelular

HPLC:

Cromatografia líquida de alta performance

LNs:

Nanopartículas lipídicas

MeOH:

Metanol

PDI:

Índice de polidispersidade

RCC:

Carcinoma de células renais

SLNs:

Nanopartículas de lipídios sólidos

UHPLC:

Cromatografia líquida de ultra alto desempenho

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