Potencial antiproliferativo e de desencadeamento de apoptose de nanopartículas lipídicas direcionadas à base de paclitaxel com internalização celular aprimorada por receptores de transferrina - um estudo em células de leucemia

Resumo

A leucemia é um câncer sanguíneo típico que se caracteriza pela numerosa duplicação e proliferação de células brancas do sangue. O objetivo principal deste estudo foi desenvolver nanopartículas multifuncionais carregadas com PTX e direcionar para células de leucemia. Neste estudo, nanopartículas lipídicas carregadas com paclitaxel decoradas com transferrina (TPLN) foram preparadas com o objetivo de aumentar a eficácia quimioterápica nas células de leucemia. Os resultados mostraram claramente o potencial de direcionamento superior de TPLN para as células cancerosas HL-60 em comparação com o das nanopartículas carregadas com paclitaxel (PLN). Para ser específico, o TPLN mostrou um efeito citotóxico significativamente maior nas células cancerosas em comparação com o do PLN, indicando a eficiência de direcionamento superior do sistema de nanopartículas decoradas com Tf. O valor de IC50 de TPLN foi de 0,45 μg / ml em comparação com 2,8 μg / ml de PLN. A TPLN induziu uma apoptose mais notável das células cancerosas e muitas das células foram distorcidas com grande presença de formação de corpo apoptótico. É importante ressaltar que TPLN mostrou uma redução notável na proporção de células viáveis ​​para ~ 65% com cerca de ~ 30% de células de apoptose (apoptose precoce e tardia). No geral, os resultados mostraram claramente o potencial de direcionamento do sistema de nanopartículas de lipídios conjugados com ligante para as células de leucemia, o que pode abrir caminho para o sucesso no tratamento do câncer.

Histórico

A leucemia é um câncer sanguíneo típico que se caracteriza pela numerosa duplicação e proliferação de células brancas do sangue [1]. A leucemia, portanto, afeta gravemente o sistema linfático e a medula óssea e resulta em alta mortalidade em vários pacientes. As células-tronco hematopoéticas anormais causam multiplicação descontrolada na medula óssea e resulta na produção de leucócitos imaturos [2, 3]. A quimioterapia é a escolha preferida de tratamento desta doença; entretanto, a maioria dos quimioterápicos não resultou na eficácia do tratamento e causou grave toxicidade aos tecidos normais [4, 5]. Portanto, o tratamento imediato da leucemia é essencial para a sobrevivência dos pacientes com câncer. Uma nova estratégia de entrega que poderia aumentar a eficácia da droga ao mesmo tempo em que reduzir seu efeito tóxico é a necessidade da época [6].

O paclitaxel (PTX) é considerado uma das drogas potentes no tratamento de vários cânceres, incluindo a leucemia [7]. O potencial efeito clínico da PTX é severamente prejudicado por seus efeitos colaterais sistêmicos, como mielossupressão nos tecidos saudáveis. Além disso, foi relatado que o medicamento livre é eliminado rapidamente da circulação sistêmica, sem provocar seu efeito terapêutico [8]. Portanto, é importante projetar o sistema de entrega adequado para aumentar a estabilidade e o efeito terapêutico do fármaco anticâncer. Entre os múltiplos sistemas de carreadores, nanopartículas lipídicas são relatadas como possuidoras de excelente estabilidade sistêmica [9, 10]. Para ser específico, nanopartículas lipídicas sólidas (SLN) são uma classe única de sistema nanocarreador atraente que evita a degradação química do fármaco encapsulado e aumenta a biodisponibilidade [11]. As características salientes do SLN incluem excelente estabilidade, liberação controlada de fármaco, estável à temperatura ambiente, uso de sistema lipídico biocompatível e biodegradável e alta eficiência de aprisionamento de fármacos lipofílicos como o paclitaxel. Espera-se que a encapsulação das nanopartículas do fármaco se acumule no tumor de uma maneira preferencial devido ao efeito de permeação e retenção (EPR) aprimorada [12,13,14]. Embora a nanopartícula possa aumentar a eficácia da droga encapsulada; no entanto, a especificidade do alvo para o tumor ainda é uma questão. Para resolver esse problema, a nanopartícula pode ser decorada com o ligante de direcionamento, que pode ter como alvo específico os receptores superexpressos nas células cancerosas e aumentar o acúmulo e a eficácia da droga [15, 16]. Neste estudo, empregamos a transferrina que se ligará especificamente ao receptor da transferrina, que é superexpresso nas células de leucemia. A leucemia é conhecida por superexpressar um grande número de receptores de transferrina. A nanopartícula conjugada com transferrina estará se acumulando nas células cancerosas de uma forma mediada por receptor [17].

Neste estudo, desenvolvemos uma nanopartícula multifuncional que consiste em nanopartículas lipídicas sólidas decoradas com transferrina e encapsuladas com paclitaxel. Para incorporar a transferrina ao SLN, sintetizamos um T _f -Conjugado de PEG-ácido oleico pela conjugação de PEG e ácido oleico que foi então conjugado com a transferrina. A presença de PEG aumentará a estabilidade dos nanocarreadores no ambiente in vitro e sistêmico. Além disso, a presença de PEG na superfície externa do transportador aumentará o potencial circulatório do sistema transportador e, portanto, a eficácia terapêutica.

No geral, o objetivo principal deste estudo foi desenvolver nanopartículas multifuncionais carregadas com PTX e direcionar para células de leucemia. O aspecto físico-químico da nanopartícula foi investigado. O efeito citotóxico do fármaco livre e da formulação carregada com fármaco foi testado em células cancerígenas de leucemia. O experimento de captação celular foi realizado para retratar a especificidade do ligante de transferrina. O efeito anticâncer superior da nanopartícula direcionada foi ainda estudado pelo ensaio de apoptose Hoechst 33342 e, em seguida, estudado quantitativamente usando citômetro de fluxo após a coloração com anexina V e PI.

Métodos

Materiais

Compritol 888 ATO (behanato de glicerol) foi gentilmente fornecido por Gattefosse (China). O colesterol, ácido oleico e paclitaxel foram adquiridos na Sigma-Aldrich, China. A transferrina humana (Tf) foi adquirida na Sigma-Aldrich, China. Todos os outros produtos químicos eram de qualidade reagente e usados ​​como tal.

Preparação de nanopartículas de lipídios sólidos conjugados com transferrina carregadas com paclitaxel

O conjugado transferrina-PEG-ácido oleico (Tf-PEG-OA) foi sintetizado com base na interação da ligação amida [18]. Resumidamente, ácido oleico, NHS e DCC em uma razão molar de 1:2:2 foram dissolvidos em solvente orgânico e agitados por 16 h. A reação foi realizada à temperatura ambiente. Separadamente, NH2-PEG-COOH foi dissolvido em DMSO e trietilamina foi adicionada e a reação foi permitida até 12 h sob atmosfera inerte. O PEG-OA assim formado foi recolhido por diálise e processo de liofilização. Agora, PEG-OA, DCC e NHS em uma razão molar de 1:2:2 foram dissolvidos em DMSO e transferrina (junto com TEA) foi adicionada à mistura de reação e a reação foi realizada em atmosfera inerte por 12 h. A formulação contendo Tf-PEG-OA assim formada foi dialisada durante 48 h e depois liofilizada e armazenada sob posterior processamento de experiências.

O SLN foi preparado pelo método de evaporação de solvente [19]. Resumidamente, PTX, Compritol 888 ATO, colesterol e Tf-PEG-OA foram dissolvidos numa mistura orgânica consistindo em etanol / clorofórmio (1:5) e agitados durante 30 min. A solução orgânica resultante foi adicionada lentamente a uma fase aquosa contendo álcool polivinílico a 1% e imediatamente homogeneizada usando homogeneizador T25 (IKA, Bangalore, Índia) a 12.000 rpm. A solução foi então sonicada durante 3 min. A dispersão foi agitada durante 12 h até todos os solventes orgânicos terem evaporado. O fármaco livre não aprisionado foi separado das nanopartículas carregadas com o fármaco por água três vezes usando um filtro centrífugo Amicon Ultra-4 (Millipore Corporation, Bedford, EUA). A eficiência de aprisionamento (EE) e a eficiência de carregamento (LE) foram determinadas pelo método HPLC. A nanopartícula carregada com a droga foi metanol e agitada por 30 min e diluída com igual volume de água. A quantidade de droga carregada foi calculada por injeção na coluna de HPLC. A nanopartícula lipídica carregada com a droga foi armazenada a 4 ° C até uso posterior.

Caracterização física de nanopartículas

O tamanho de partícula e a distribuição de diferentes nanopartículas foram avaliados pelo método de espalhamento dinâmico de luz (DLS) usando Zetasizer ZS Nano Malvern Instruments, UK. As partículas foram diluídas com água destilada e utilizadas para as análises. O estudo foi realizado à temperatura ambiente em triplicados.

A morfologia das nanopartículas foi observada usando microscópio eletrônico de transmissão (TEM) usando JEM-2000EX (JEOL, Japão). As nanopartículas foram coradas com ácido fosfotungístico e deixadas por 15 min. As partículas foram então drenadas da água e secas em uma luz infravermelha por 5 min. As partículas foram fotografadas usando TEM.

Estudo de liberação de drogas in vitro

As características de liberação do fármaco in vitro de duas nanopartículas foram estudadas usando o método de diálise. Resumidamente, 1 ml de dispersões de nanopartículas foram embalados em um saco de membrana de diálise (MWCO:3500) com ambas as extremidades da membrana devidamente seladas. O experimento de liberação foi iniciado colocando o saco de diálise selado na extremidade em 10 ml de meio de liberação em um agitador automático a uma velocidade de 100 rpm. Em um ponto de tempo específico, 1 ml de amostra foi coletado e analisado para liberação de droga usando HPLC. Sistema de HPLC Perkin Elmer (Norwalk, EUA) equipado com uma bomba (série 200), desgaseificador a vácuo on-line (série 200), amostrador automático (série 200), forno de coluna (série 200), detector UV / VIS (série 200 ) foi usado. Foi usada uma coluna C18 (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) protegida com cartucho de proteção de pré-coluna RP18 (30 × 4,6 mm, 10 μm; Norwalk, EUA). Um gradiente linear foi aplicado; 0 min, 10% de acetonitrila; 30 min, 90% de acetonitrilo e analisado a 214 nm.

Ensaio de citotoxicidade

A citotoxicidade do fármaco livre e das nanopartículas carregadas com fármaco foi avaliada pelo ensaio de 4,5- (dimetiltiazol-2-il) 2,5-difenil-tetrazólio (MTT). As células HL-60 em uma densidade de semeadura de 8.000 células por poço foram semeadas em uma placa de 96 poços e incubadas por 24 h. As células foram então tratadas com drogas livres e formulações carregadas de drogas em diferentes concentrações e posteriormente incubadas por 24 h a 37 ° C em CO umidificado ₂ (5%) incubadora. As células foram então tratadas com 10 μl de solução de MTT (5 mg / ml) por 4 h. As células foram então expostas a DMSO e incubadas por 20 min. Os cristais de formazan foram então estudados quanto à absorbância usando um leitor de microplacas (Multiskan GO, EUA) a 570 nm. A quantidade de absorvância de formazan é diretamente proporcional à quantidade de células viáveis ​​presentes em cada poço.

Captação celular de nanopartículas

A eficiência de direcionamento das nanopartículas para as células de leucemia foi avaliada pelo experimento de captação celular em nível in vitro. Resumidamente, as células HL-60 foram semeadas em uma placa de 6 poços a uma densidade de semeadura de 3 × 10 ⁵ células por poço. As células foram incubadas por 24 horas antes do tratamento. A fim de observar a fluorescência e o rastreamento das nanopartículas, a nanopartícula foi carregada com rodamina B como um corante fluorescente. A nanopartícula carregada com corante foi exposta às células cancerosas e incubada por 3 h. As células foram então lavadas e montadas em uma lâmina de vidro. As células foram então observadas usando um microscópio confocal de varredura a laser (CLSM, Nikon, Japão).

Ensaio Hoechst 33342

O ensaio de apoptose qualitativo foi realizado usando coloração Hoechst 33342. Resumidamente, as células HL-60 foram semeadas em uma placa de 6 poços a uma densidade de semeadura de 3 × 10 ⁵ células por poço. As células foram incubadas por 24 horas antes do tratamento. As células foram tratadas com as respectivas formulações e incubadas por 24 h. As células foram então lavadas duas vezes com PBS e fixadas com solução de paraformaldeído a 4% por 10 min. A apoptose nas células foi então observada usando um microscópio fluorescente.

Ensaio de apoptose baseado em citômetro de fluxo

A apoptose quantitativa foi avaliada por citômetro de fluxo por coloração com Anexina V e PI. Resumidamente, as células HL-60 foram semeadas em uma placa de 6 poços a uma densidade de semeadura de 3 × 10 ⁵ células por poço. As células foram incubadas por 24 horas antes do tratamento. As células foram então tratadas com fármaco livre e formulações carregadas de fármaco em diferentes concentrações e posteriormente incubadas por 24 h a 37 ° C em incubadora de CO2 umidificado (5%). No dia seguinte, as células foram lavadas adequadamente e as células foram extraídas com cuidado. As células foram centrifugadas e o pellet tratado com 2,5 μl de anexina V e 2,5 μl de PI, respectivamente, e incubado por 15 min. O volume foi então completado para 1 ml e a triagem celular foi realizada por meio de citômetro de fluxo (BD FACS, Biosciences, EUA).

Ensaio de formação de colônia

As 1000 células / poço foram semeadas em uma placa de 6 poços com volume de meio ajustado para 2 ml. As células foram deixadas formar uma colônia por 2 dias. As células foram tratadas com diferentes formulações com dose de PTX equivalente a 0,1 μg / ml e incubadas por 10 dias. As placas são lavadas com PBS e fixadas em metanol e coradas com hematoxilina e lavadas e secas ao ar. A densidade da colônia foi contada usando gabinete de luz MultimageTM (Alpha Innotech Corporation, San Leandro, CA) com a ajuda do software AlphaEaseFCTM.

Análise estatística

A significância das diferenças foi avaliada usando t de Student bicaudal testes ou ANOVA unilateral. As diferenças foram consideradas significativas a um nível de p <0,05.

Resultados e discussão

A leucemia é um câncer sanguíneo típico que se caracteriza pela numerosa duplicação e proliferação de células brancas do sangue. Neste estudo, desenvolvemos uma nanopartícula multifuncional que consiste em nanopartículas lipídicas sólidas decoradas com transferrina e encapsuladas com paclitaxel. Para incorporar a transferrina ao SLN, sintetizamos um conjugado Tf-PEG-ácido oleico pela conjugação de PEG e ácido oleico que foi então conjugado com a transferrina (Fig. 1). O PEG-ácido oleico-Tf é usado para fins múltiplos na preparação de partículas. A presença de ligante Tf na superfície da partícula aumentará a especificidade do alvo das partículas em relação às células cancerosas superexpressas do receptor. A presença de PEG na superfície externa fornecerá o equilíbrio estérico tão necessário que conferirá estabilidade às partículas individuais. Adicionamos esta nota ao manuscrito.

Apresentação esquemática da preparação de nanopartículas de lipídios sólidos decoradas com transferrina carregadas com PTX

Caracterização físico-química de nanopartículas

A nanopartícula carregada com a droga foi preparada pelo método de evaporação de solvente seguido de homogeneização. O tamanho médio de partícula de nanopartículas lipídicas carregadas com PTX (PLN) foi de ~ 140 nm, enquanto o tamanho de partícula final de nanopartículas lipídicas carregadas com PTX decorada com transferrina (TPLN) foi de ~ 160 nm (Fig. 2a). O ligeiro aumento no tamanho das partículas foi atribuído à conjugação da transferrina à superfície das nanopartículas. Foi relatado que as características das partículas incluem tamanho e carga são fatores importantes para seu desempenho sistêmico. O tamanho e a carga desempenham um papel importante na absorção celular e no efeito tóxico para as células. Um tamanho de partícula inferior a 200 nm, conforme observado no presente estudo, é relatado como o mais favorável para o direcionamento do câncer, pois permitirá o acúmulo específico das partículas no tecido canceroso devido ao efeito de permeação e retenção aprimorada (EPR) [ 9, 20, 21]. Da mesma forma, a carga superficial da nanopartícula determina a interação da partícula de estabilidade coloidal com a superfície da célula. A carga superficial média de TPLN foi - 22,5 ± 1,56 mV, indicando seu potencial para o direcionamento do câncer. A morfologia da partícula foi, por sua vez, estudada por TEM (Fig. 2b). As partículas eram de forma perfeitamente esférica e uniformemente distribuídas na grade TEM. A distribuição uniforme das partículas indica o sucesso da metodologia de preparação.

a Distribuição de tamanho de partícula de TPLN medida por análise de espalhamento dinâmico de luz (DLS). b Medição da forma de partícula por microscópio eletrônico de transmissão (TEM). Os experimentos DLS foram realizados em triplicata ( n =3)

Carregamento de drogas e liberação in vitro de drogas

A eficiência de aprisionamento de PTX em nanopartículas foi observada em 92,5 ± 1,35% com uma eficiência de carregamento ativo de 8,6% w / w . As características de liberação de drogas in vitro de PLN e TPLN foram estudadas pelo método de diálise. O PLN e o TPLN mostraram uma liberação sustentada da droga do sistema transportador, indicando sua adequação para aplicações direcionadas ao câncer. Por exemplo, ~ 30% da droga liberada de ambas as nanopartículas no final do período de estudo de 24 horas (Fig. 3). Da mesma forma, a liberação da droga foi mantida até o final de 75 h, com uma liberação média em torno de ~ 65% foi observada. Deve-se notar que o TPLN mostrou uma liberação muito mais sustentada de drogas em comparação com o PLN. A liberação ligeiramente menor do fármaco foi atribuída principalmente à conjugação do ligante da transferrina à superfície da nanopartícula. O alto peso molecular da transferrina pode inibir em grande medida a liberação do fármaco. Em geral, a liberação sustentada e prolongada do fármaco da nanopartícula indica que o fármaco está bem disperso com a matriz lipídica, o que evitou a liberação inicial de explosão ou o padrão de liberação bifásico. De modo geral, uma liberação controlada da droga do sistema carreador pode potencializar o tratamento do câncer.

Características de liberação de droga in vitro de PTX de PLN e TPLN de solução salina tamponada com fosfato (pH 7,4). A liberação do fármaco foi estudada pelo método de diálise e o fármaco quantificado pelo método de HPLC. A medição foi realizada n =3

Captação celular das nanopartículas

O potencial de direcionamento das nanopartículas para a célula cancerosa de leucemia foi testado por microscopia confocal de varredura a laser (CLSM). As nanopartículas foram expostas às células cancerosas e incubadas por 3 h. A rodamina B foi usada como um corante fluorescente para rastrear a distribuição das nanopartículas nas células cancerosas. Conforme mostrado na Fig. 4, a intensidade da fluorescência vermelha foi relativamente menor no PLN em comparação com o TPLN. Os resultados mostraram claramente a fluorescência notavelmente maior no citoplasma da célula em comparação com a do PLN, indicando o potencial de direcionamento superior do TPLN para as células cancerosas. Uma intensidade fluorescente notavelmente maior foi atribuída principalmente à conjugação da transferrina à superfície das nanopartículas. O Tf ligou-se preferencialmente aos receptores de Tf superexpressos nas células cancerosas e resultou em um maior acúmulo de nanopartículas nas células cancerosas [22].

Análise de captação celular de TPLN e PLN usando microscópio de varredura a laser confocal (CLSM) a 37 ° C. Rodamina B foi usada como corante fluorescente e incubada por 3 h. A análise de captação celular foi realizada após incubação das nanopartículas por 3 h sob 37 ° C em incubadora. A barra de escala é 20 μm

Ensaio de citotoxicidade in vitro

O efeito citotóxico in vitro de PTX, PLN e TPLN livres em células HL-60 foi avaliado pelo ensaio MTT. Como mostrado na Fig. 5, todas as formulações exibiram um efeito citotóxico dependente da dose típico nas células cancerosas de leucemia. Pode-se observar que embora o PTX tenha mostrado um efeito dependente da dose, no entanto, o PLN apresentou um efeito citotóxico relativamente maior, que pode ser devido à maior captação intracelular e liberação sustentada do fármaco das nanopartículas. Para ser específico, o TPLN mostrou um efeito citotóxico significativamente maior nas células cancerosas em comparação com o do PLN, indicando a eficiência de direcionamento superior do sistema de nanopartículas decoradas com Tf. O valor de IC50 de TPLN foi de 0,45 μg / ml em comparação com 2,8 μg / ml de PLN. Uma diminuição de seis vezes no valor de IC50 foi atribuída principalmente à maior captação intracelular de TPLN nas células cancerosas superexpressas do receptor Tf. Um maior potencial de entrega de TPLN em comparação com PLN e a liberação sustentada de fármaco para o alvo nuclear pode ser a principal razão que contribui para o maior efeito citotóxico nas células cancerosas. Os nanocarreadores decorados com Tf foram explorados como um alvo para entregar drogas anticâncer nas células cancerosas, diminuindo assim a concentração efetiva da droga administrada e superando os fatores relacionados à resistência a múltiplas drogas (MDR) [23].

Análise de citotoxicidade de fármaco livre e nanopartículas carregadas de fármaco por ensaio de MTT. Após tratamento das células com diferentes concentrações de fármacos e incubadas por 24 h, as células foram analisadas por ensaio de MTT e utilizando leitor de placas. A medição foi realizada n =6. * p <0,05 é a diferença estatística entre TPLN e PTX

Ensaio de apoptose Hoechst 33342

O potencial citotóxico das nanopartículas foi avaliado posteriormente pelo ensaio de apoptose Hoechst 33342. As células após tratamento com a respectiva formulação foram coradas com Hoechst 33342 e incubadas durante 15 min. Como pode ser visto na Fig. 6, as células de controle não tratadas eram esféricas com características típicas de células saudáveis. As células tratadas com PTX, entretanto, mostraram irregularidade na forma celular. Um dano celular típico e apoptose podem ser vistos no grupo tratado com PLN, que pode ser devido ao aumento da captação nas células cancerosas. A TPLN induziu uma apoptose mais notável das células cancerosas e muitas das células foram distorcidas com grande presença de formação de corpo apoptótico. A notável clivagem celular e indução de apoptose foi consistente com as patentes de viabilidade celular, conforme descrito no parágrafo anterior.

Ensaio de apoptose baseado em Hoechst 33342. As células foram coradas com Hoechst 33342 e a apoptose foi analisada por microscópio de fluorescência. As células foram incubadas com as respectivas formulações por 24 h. A barra de escala é de 50 μm

Ensaio de apoptose baseado em citômetro de fluxo

A análise quantitativa do ensaio de apoptose foi realizada por citômetro de fluxo após coloração com Anexina V e kit de coloração PI. As células foram tratadas com as respectivas formulações e incubadas por 24 h. As células foram então coradas com Anexina V e PI. Como mostrado na Fig. 7, as células de controle não tratadas eram viáveis ​​com mais de 99% das células presentes na câmara viável. O tratamento PTX reduziu a proporção de células viáveis ​​para 90% com cerca de ~ 9% de apoptose. O PLN mostrou cerca de ~ 10% de células em apoptose com ~ 7% de células necróticas. É importante ressaltar que o TPLN mostrou um significativo ( p <0,05) redução na proporção de células viáveis ​​para ~ 65% com cerca de ~ 30% de células de apoptose (apoptose precoce e tardia). O notável potencial de apoptose de TPLN foi atribuído à captação celular mediada por receptor e maior acúmulo de fármaco anticâncer nas células cancerosas que podem aumentar o efeito anticâncer nas células tumorais [24, 25].

Ensaio de apoptose baseado em citômetro de fluxo. As células foram tratadas com a respectiva formulação e após 24 h, as células foram coradas com Anexina V e PI por 15. As células foram então classificadas usando citômetro de fluxo. As células foram incubadas com as respectivas formulações por 24 h. A medição foi realizada n =3. * p <0,05 é a diferença estatística entre TPLN e PTX

Ensaio de formação de colônia

A capacidade de formação de colônias na presença da formulação respectiva foi testada pelo ensaio de formação de colônias Fig. 8. Como mostrado, PTX e PLN possuem um ligeiro potencial para inibir a capacidade de formação de colônias de células cancerosas. É importante ressaltar que o TPLN mostrou capacidade notável de controlar a capacidade de formação de colônias das células cancerosas. TPLN mostrou ~ 20% de formação de colônias em comparação com ~ 70% de formação de colônias para PTX, indicando o efeito anticâncer superior de TPLN. A manutenção da leucemia mieloide aguda depende de uma população menor de células-tronco leucêmicas e células progenitoras que têm a capacidade de formar colônias; é importante testar se o TPLN é capaz de atingir o pool de células formadoras de colônias. Como os resultados mostram, pode reduzir significativamente o risco de câncer de leucemia, sugerindo uma capacidade de prevenir o desenvolvimento de câncer e / ou eliminar células malignas em estágio inicial. Portanto, o ensaio de formação de colônias fornece informações cruciais sobre a eficácia anticâncer potencial das formulações.

Ensaio de formação de colônias. As células foram submetidas ao protocolo de ensaio de formação de colônias após o respectivo tratamento. As células foram incubadas com as respectivas formulações por 24 h. ** p <0,001 é a diferença estatística entre PTX e PTLN

Conclusão

No geral, nanopartículas de lipídios carregadas com paclitaxel decoradas com transferrina foram preparadas com o objetivo de aumentar a eficácia quimioterápica nas células de leucemia. Os resultados mostraram claramente o potencial de direcionamento superior do TPLN para as células cancerosas em comparação com o do PLN. Para ser específico, o TPLN mostrou um efeito citotóxico significativamente maior nas células cancerosas em comparação com o do PLN, indicando a eficiência de direcionamento superior do sistema de nanopartículas decoradas com Tf. É importante ressaltar que o TPLN mostrou uma notável apoptose de células cancerosas e exibiu forte capacidade antitumoral em ambas as células HL-60. No geral, os resultados mostraram claramente o potencial de direcionamento do sistema de nanopartículas de lipídios conjugados com ligante para as células de leucemia, o que pode abrir caminho para o sucesso no tratamento do câncer. A eficácia terapêutica de formulações em modelo clínico animal e sua biodistribuição farão parte de nosso próximo trabalho.

Abreviações

EPR:

Maior permeação e efeito de retenção

OA:

Ácido oleico

PEG:

Polietileno glicol

PLN:

Nanopartículas lipídicas carregadas com PTX

PTX:

Paclitaxel

SLN:

Nanopartículas de lipídios sólidos

Tf:

Transferrina

TPLN:

PLN conjugado com Tf

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