Entrega Direcionada de Câncer: Decoração de Nanovesículas com pHLIP para Reconhecimento de Microambiente Tumoral Ácido

Resumo

Acidez na superfície de células cancerígenas é marca registrada de microambientes tumorais, que não depende perfusão tumoral, podendo servir como biomarcador geral para direcionar células tumorais. Usamos peptídeo inserção pH (baixo) (pHLIP) para decoração lipossomos e niossomas. pHLIP detecta pH na superfície células cancerígenas e insere na membrana células alvo, trazendo nanomaterial proximidade próxima membrana celular. Lipossomos DMPC e niossomas Tween 20 ou Span 20 com sem pHLIP em seu revestimento foram completamente caracterizados obter compreensão fundamental características nanocarreadores facilitar design racional nanovetores sensíveis acidez. Estabilidade amostras ao longo tempo e presença soro demonstrada. Tamanho, potencial ζ, morfologia nanovetores, bem como capacidade aprisionar sonda hidrofílica modular sua liberação investigados. Vesículas decoradas pHLIP poderiam ser úteis obter liberação prolongada (modificada) substâncias biologicamente ativas direcionando tumores outros tecidos doentes ácidos.

Introdução

Cerca de século atrás, Paul Ehrlich flutuou ideia realizar "balas mágicas" entrega específica mais eficaz fármacos [1]. "Balas mágicas" devem proteger fármaco entregue ambiente hostil, diminuir efeitos colaterais direcionando fármaco tecido doente, melhorar farmacocinética farmacodinâmica fármaco, modular liberação fármaco [2].

1965, Bangham observou vesículas baseadas fosfolipídeos primeira vez [3] anos seguintes, Gregory Gregoriadis estabeleceu conceito lipossomos poderiam encapsular fármacos então usados sistemas entrega fármacos. Particular, compostos bicamadas fosfolipídeos fechadas (lamelas), onde cadeias lipídicas hidrofóbicas fechadas entre duas camadas grupos cabeça hidrofílicos. Bicamada fechada envolve núcleo aquoso, permitindo localização fármacos lipofílicos hidrofílicos respectivamente [4, 5].

Tamanho lipossomo parâmetro crítico influenciando destino transportador após administração, termos absorção proteínas plasmáticas, reconhecimento sistema reticuloendotelial (RES), tempo meia-vida circulação, tráfego celular. Nanocarreadores podem favorecer internalização celular direcionamento tumor, assim muitos pesquisadores focaram "nanonização" [6,7,8,9].

Obter nanocarreadores mais versáteis econômicos, surfactantes sintéticos empregados obter sistemas entrega fármacos tipo lipossomo. Surfactantes não-iônicos amplamente usados este propósito, capazes auto-montar vesículas unilamelares multilamelares (não-iônicos lipossomos, niossomas, ou vesículas surfactante não-iônico). Ésteres sorbitano surfactantes (Spans®) substâncias lipofílicas amplamente usadas preparação niossomas. Prolongar tempo circulação vesículas obter nanocarreadores "stealth", incorporação polietileno glicol (PEG) abordagem padrão ouro: através conjugação, ésteres sorbitano etoxietilados surfactantes (Tweens®) obtidos. Ambos Span Tween caracterizados diferente balanço hidrofílico/lipofílico (HLB) valor escolha surfactante permite preparar niossomas propriedades desejadas [10]. Adição colesterol usada aumento estabilidade bicamada esticando caudas surfactante, afetando temperatura transição fase gel líquido surfactante conferindo rigidez bicamada lipofílica [11, 12]. Nanocarreador "otimizado" projetado melhorar formulação e/ou aumentar direcionamento [10].

Atualmente, câncer uma principais causas morte mundo. Abordagens terapêuticas atuais número limitações incluindo entrega não-eficiente fármacos tumores falta direcionamento tumor associada efeitos colaterais indesejáveis perigosos, que abordagens nanotecnologia poderiam ajudar superar [13].

Atualmente, várias abordagens direcionamento desenvolvimento. A maioria baseada direcionamento biomarcadores particulares superexpressos superfície células cancerígenas. No entanto, devido fato tumores humanos muito heterogêneos, abordagens mais gerais direcionamento tumor muito mais vantajosas. Acidez superfície células cancerígenas marca registrada microambientes tumorais, não depende perfusão tumoral, assim pode servir biomarcador geral direcionamento células tumorais [14]. Tecnologia pH (low) insertion peptide (pHLIP) desenvolvendo rapidamente direcionamento imagem terapêutico moléculas pequenas, bem nanomateriais tumores. pHLIP detecta pH superfície células cancerígenas insere membrana células alvo [15, 16]. Mecanismo inserção pHLIP desencadeado protonação resíduos carregados negativamente peptídeo baixo pH (pH < 7,0). Isso leva aumento hidrofobicidade peptídeo deslocando equilíbrio particionamento peptídeo bicamada [17]. Nanocarreadores decorados pHLIPs biocompatíveis, podem direcionar tumores, demonstram captação celular aumentada células cancerígenas. Entre NPs revestidos pHLIP investigados lipídicos, poliméricos, baseados metal [18,19,20,21].

Objetivo presente trabalho caracterizar completamente nanovesículas vesiculares novidade decoradas pHLIP obter compreensão fundamental características nanocarreadores facilitar design racional nanovetores sensíveis acidez.

Materiais e Métodos

Materiais

Polioxietilenesorbitano monolaurato (Tween 20), sorbitano monolaurato (Span 20), colesterol (Chol), sal Hepes {N-(2-hidroxietil) piperazina-N'-(2-etanosulfônico)}, soro humano, Sephadex G-75, calcina, difenilhexatrieno (DPH) comprados Sigma-Aldrich. 1,2-Dimistoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DMPC) 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[4-(p-maleimidofenil)butiramida] sal sódio (DSPE-maleimide) comprados Avanti Polar Lipids pireno obtido Fluka. Peptídeo pHLIP (ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT) sintetizado purificado CS Bio. Todos outros produtos reagentes grau analítico.

Síntese DSPE-pHLIP

pHLIP conjugado lipídios DSPE metanol conjugação covalente DSPE-maleimide único resíduo cisteína N-terminal pHLIP, como descrito anteriormente [18, 21, 22]. Brevemente, 5 mg peptídeo dissolvido 250 µL metanol (soprado argônio) DSPE-maleimide (solução estoque 9,9 mM) dissolvido clorofórmio misturados razão molar 1:1. Mistura reação mantida temperatura ambiente cerca 2–6 h até conjugação completada. Progresso reação conjugação DSPE-maleimide pHLIP monitorado RP-HPLC usando gradiente 25 a 80% acetonitrila água contendo 0,05% TFA monitorando diminuição pico correspondente pHLIP não marcado mistura reação. Construído sintetizado caracterizado espectrometria massa SELDI-TOF. Concentração conjugado DSPE-pHLIP determinada absorbância usando coeficiente extinção molar pHLIP: ε₂₈₀ = 13.940 M⁻¹ cm⁻¹.

Preparação Purificação Vesículas

Método evaporação camada fina usado preparar vesículas surfactante não-iônico (Tween 20 ou Span 20) fosfolipídeo (DMPC), com sem pHLIP. Cada formulação vesícula, colesterol adicionado diferentes razões molares (Tabela 1) [23].

Composição amostra otimizada escolhendo estruturas bem-caracterizadas anteriormente [24, 25] mesma quantidade pHLIP adicionada.

Componentes lipofílicos primeiro dissolvidos mistura CHCl₃:CH₃OH (3:1); solvente orgânico então removido vácuo diferentes temperaturas dependendo amostra. Filme obtido hidratado 5 mL tampão Hepes (0,01 M pH 7,4) ou solução calcina sódio 10⁻² M. Suspensão vortex-misturada cerca 5 min, seguida sonicação (ver Arquivo Adicional 1: Tabela S1, informação suplementar) usando microprobe operando 20 kHz (VibraCell-VCX 400-Sonics, Taunton, MA, EUA). Sonicação LipoDMPC conduzida atmosfera inerte prevenir oxidação.

Suspensão vesícula então purificada cromatografia permeação gel usando Sephadex G-75 (coluna vidro 50 × 1,2 cm) tampão Hepes eluente. Depois, suspensão vesícula purificada filtrada celulose filtros poro diâmetro apropriado.

Mesmo método preparação usado preparar niossomas lipossomos revestidos pHLIP.

Medidas Espalhamento Luz Dinâmico

Tamanho médio distribuição tamanho vesículas medidos T = 25 °C espalhamento luz dinâmico (DLS), usando Malvern NanoZetaSizer ZS90, equipado laser 5 mW HeNe (comprimento onda λ = 632,8 nm) correlacionador digital. Funções autocorrelação normalizadas intensidade espalhada ângulo 90° analisadas algoritmo Contin obter distribuição coeficiente difusão D partículas, hence distribuição raio hidrodinâmico efetivo R_H vesículas via relação Stokes-Einstein R_H = K_B T/6πηD, onde K_B T energia térmica η viscosidade solvente. Largura distribuição tamanho niossomas/lipossomosrather pequena não-desprezível. Valores relatados Tabela 2 correspondem diâmetro hidrodinâmico médio ponderado intensidade partículas [26].

Medidas Potencial ζ

Medidas mobilidade eletroforética realizadas técnica eletroforese laser Doppler, usando aparelho Malvern NanoZetaSizer ZS90. Mobilidade u convertida ζ-potencial usando relação Smoluchowski ζ = uη/є, onde η є viscosidade permitividade fase solvente respectivamente [27].

Espalhamento Raio-X Pequeno Ângulo

Experimentos espalhamento raio-X pequeno ângulo (SAXS) realizados European Synchrotron Radiation Facility (ESRF, Grenoble, França). Uso beamline ID02 high-brilliance permitiu medidas soluções diluídas região transferência momento 0,1 nm⁻¹ ≤ q ≤ 6 nm⁻¹, q = (4π/λ)sin(θ/2), onde θ ângulo espalhamento λ = 0,1 nm comprimento onda raio-X. Escala comprimento investigada entre 1 60 nm, adequada acessar estrutura interna niossomais vesículas lipossomais. Experimentos realizados T = 25 °C curto tempo irradiação 0,1 s prevenir dano radiação. Cada amostra, intensidade espalhada diferentes ângulos capturada detector 2D, então angularmente reagrupada, subtraída fundo contribuições solvente, analisada obter informação forma estrutura interna vesículas solução.

Caso vesículas unilamelares, bicamada fechada modelada três cascas concêntricas correspondentes grupos cabeça externos, cadeias hidrofóbicas, grupos cabeça internos. Distribuição Schulz tamanho vesícula assumida.

Cryo-TEM

Solução vesícula (5 µL gota) espalhada grade microscopia elétrica Lacey formar/carbono preservada estado congelado-hidratado congelamento rápido etano líquido. Processo vitrificação realizado sistema FEI Vitrobot configuração single blot 3 s, offset 1, drenagem tempo espera 1 s. Microscopia eletrônica transmissão (TEM) (JEOL 2100) tensão aceleração 200 kV ampliações faixa × 10.000 a × 150.000 usada imaginar vesículas.

Estudos Estabilidade

Estudos estabilidade física niossomas lipossomos, preparados com sem pHLIP, realizados duas diferentes temperaturas armazenamento (25 °C 4 °C). Objetivo avaliar se mudanças significativas tamanho ζ-potencial dispersão vesículas ocorrem período 90 dias. Amostras cada lote retiradas intervalos tempo definidos (1, 30, 60, 90 dias) tamanho ζ-potencial vesículas determinados como descrito anteriormente.

Similarmente, estabilidade amostras investigada presença fluidos biológicos, como soro humano. Suspensões contatadas 45% soro humano 37 °C. Intervalos tempo definidos (0, 30 min, 1 h, 2 h, 3 h), variações tamanho ζ-potencial vesículas determinadas como descrito.

Caracterização Bicamada

Fluididade microviscosidade-polaridade bicamadas niossomais lipossomais acessadas medições fluorescência duas sondas fluorescentes, difenilhexatrieno (DPH) pireno, respectivamente, localizadas região hidrofóbica membrana bicamada. Ambos DPH (2 mM) pireno (4 mM), 220 µL 2,5 mg respectivamente, adicionados surfactante mistura fosfolipídeo/colesterol antes preparação vesícula [28]. Depois, vesículas carregadas pireno purificadas como descrito anteriormente, enquanto vesículas carregadas DPH filtradas progressivamente menor poro tamanho (5,0 a 0,22 µm).

Medidas anisotropia fluorescência realizadas temperatura ambiente usando espectrofluorômetro LS55 (PerkinElmer, MA, EUA) λ_exc = 400 nm λ_em = 425 nm anisotropia fluorescência (A) amostras calculada equação [29]:

$$ A=\frac{I_{vv}-{I}_{vh\kern0.5em }x\ G}{I_{vv}+2{I}_{vh}\ x\ G} $$

onde I_vv I_vh intensidades fluorescência emitida (unidades arbitrárias), respectivamente, paralela perpendicular direção luz excitação verticalmente polarizada. Fator correção G = I_hv/I_hh razão entre componentes emissão polarizados verticalmente horizontalmente quando luz excitação horizontalmente polarizada. Valores anisotropia fluorescência inversamente proporcionais fluidez membrana. Portanto, alto valor anisotropia fluorescência corresponde alta ordem estrutural e/ou baixa fluidez membrana [30].

Avaliar microviscosidade micropolaridade bicamada vesícula, experimentos fluorescência pireno realizados espectrofluorômetro Perkin-Elmer LS55 λ_exc = 330 nm, registrando espectro emissão faixa 350 < λ_em < 550 nm [28]. Estrutura fina fluorescência pireno apresenta cinco picos. Razão entre intensidades primeiro (372 nm) terceiro (382 nm) bandas vibracionais espectro fluorescência pireno, I₁/I₃, relacionada polaridade ambiente pireno [31]. De fato, baixos valores razão I₁/I₃ correspondem ambiente não-polar. Além, moléculas pireno incorporadas bicamada vesícula podem formar excímeros intramoleculares processo sensível viscosidade microambiente sonda [32]. Portanto, razão intensidade fluorescência excímero/monômero, I_E/I_M, relacionada microviscosidade.

Estudos realizados vesículas preparadas ambos com sem pHLIP resultados obtidos então comparados.

Estudos Liberação Calcina

Vesículas surfactante não-iônico fosfolipídeo carregadas calcina concentração 10⁻² M. Esta concentração, fluorescência calcina auto-quenched [33]. Medidas dequenching usadas determinar liberação calcina núcleo aquoso vesícula. Sonda fluorescente carregada vesículas durante hidratação filme adição 5 mL solução aquosa calcina. Suspensões vesículas purificadas cromatografia permeação gel, contatadas 45% soro humano ou Hepes, carregadas dentro bolsa diálise celulose (corte peso molecular 8.000 Da Spectra/Por®). Experimentos liberação realizados 37 °C, agitação magnética tampão Hepes (10 mM, pH 7,4) meio externo. Aliquotas meio externo retiradas diferentes tempos 0–24 h. Tempo tempo, aliquotas retiradas reintroduzidas sistema [34].

Liberação calcina monitorada medições fluorescência meio usando espectrofluorômetro Perkin-Elmer LS50B λ_ex = 492 λ_em = 520 nm. Valor referência F_∞ (unidades arbitrárias), correlacionado quantidade total calcina aprisionada vesículas [35], determinado após disrupção vesículas usando álcool isopropílico (1:1 v/v). Porcentagens liberação (F%) cada ponto tempo obtidas equação:

$$ F\%={F}_t/{F}_{\infty }x\ 100 $$

onde F_t (unidades arbitrárias) fluorescência lida ponto tempo específico t.

Análise Estatística

ANOVA one-way usada análise estatística. Teste Bonferroni t posteriori realizado avaliar significância estatística teste ANOVA. Valor p < 0,05 considerado estatisticamente significativo. Resultados média três experimentos ± desvio padrão.

Resultados e Discussão

Vesículas Tween20-, Span20-, DMPC-, preparadas com sem DSPE-pHLIP, caracterizadas tamanho ζ-potencial (Tabela 2).

Segundo resultados apresentados Tabela 2, amostras analisadas não mostram variações significativas tamanho ζ-potencial, independentemente presença pHLIP.

Acima faixas tamanho confirmadas meio técnica análise diferente, como cryo-TEM (Fig. 1).

Estrutura interna niossomas/vesículas com sem DSPE-pHLIP determinada experimentos SAXS. Espectros intensidade SAXS, apresentados Fig. 2, diferentes, indicando cada sistema características peculiares.

Niossomas baseados Tween20 unilamelares, enquanto vesículas DMPC exibem certo grau multilamelaridade (como lipossomos), mostrado presença pico característico q ≅ 1 nm⁻¹, correspondendo distância interlamelar 6 nm (cerca 5 nm bicamada lipídica 1 nm água). Vesículas baseadas Span20 definitivamente multilamelares, pico característico q = 1,6 nm⁻¹ correspondendo distância interlamelar 3,8 nm, correspondendo duas vezes comprimento molécula Span20. Resultados indicam casca multicamada vesículas Span20 composta bicamadas adjacentes quase sem água interlamelar.

Presença DSPE-pHLIP (menos 1% fração molar) não afeta dramaticamente sistemas. Intensidade espalhada todo q-range investigado bastante similar, indicando fração comparável material estruturado comparável tamanho geral partículas vesiculares.

Vesículas baseadas DMPC mostram leve aumento número bicamadas dentro lipossomo, deduzível aumento intensidade pico Bragg q = 1 nm⁻¹. Inserção baixa fração cadeias DSPE C18 ligadas cada molécula peptídeo não muda espessura bicamada lipídica, principalmente ditada grande fração colesterol relação DMPC (cerca 40–50%). Esta concentração colesterol, cadeias lipídicas organizadas fase líquido ordenado (Lo), caracterizadas desacoplamento fraco ordem posicional lateral cadeias relação alta ordem orientacional ao longo cadeias capaz hospedar poucas cadeias C18 sem mudança estrutural [36]. Vesículas multilamelares baseadas Span20 também mostram nenhuma mudança estrutura interna.

Sistema Tween20 + pHLIP, pequena quantidade cristalitos colesterol presente, mostrado pico agudo típico q = 1,84 nm⁻¹ (distância característica 3,41 nm), estrutura vesícula inafetada. Presença poucos microcristalitos frequentemente encontrada associada niossomas baseados Tween [37] quantidade dependendo composição, procedimento preparação, purificação. Fig. 2, dois espectros experimentais Tween20 Tween20 + pHLIP vesículas mostrados junto curvas ajustadas obtidas modelagem bicamada fechada esférica três cascas concêntricas: grupos cabeça externos, cadeias, grupos cabeça internos. Tamanho médio ajustado vesículas cerca 168 nm ambos sistemas, concordância resultados DLS. Parâmetros estruturais mesmos duas bicamadas fechadas (ver Arquivo Adicional 1: Figura S1 Tabela S2) exceto casca externa: presença DSPE-pHLIP, leve diminuição (5%) densidade elétrica grupos cabeça observada (0,42 a 0,40 e/ų), junto aumento rugosidade camada. Este resultado indica adição DSPE-pHLIP afeta principalmente casca externa vesículas. Consistente imagem onde cadeias C18 DSPE inserem bicamada ancoram peptídeo superfície vesícula, entre grupos cabeça polietileno-glicol estendidos ramificados. Notamos capacidade peptídeo pHLIP si (não ligado moléculas lipídicas) interagir superfície externa vesículas alto pH inserir bicamada baixo pH observada recentemente SAXS caso bicamadas fosfolipídeos insaturados [38]. Presente estudo, fração molar peptídeo significativamente menor peptídeo ligado lipídios, objetivo projetar nanovetores fármacos sensíveis pH revestidos pHLIP. Associação pHLIP impulsionada interação hidrofóbica cadeias C18 DSPE conjugadas inserindo região hidrofóbica nanovetor. Peptídeo pHLIP ancorado encontra região grupos cabeça externos, propenso interagir membranas alvo pH ácido e/ou liberar conteúdo nanovetor após rearranjo bicamada ambiente baixo pH.

Investigar se presença pHLIP poderia afetar propriedades microreológicas bicamada (fluidez, microviscosidade, polaridade), caracterização camada lipofílica realizada. Estudos caracterização conduzidos usando sonda fluorescente pireno, adicionada amostras início procedimento preparação. Devido natureza lipofílica, insere bicamada vesícula fornece informação polaridade microviscosidade ambiente membrana.

Mostrado Tabela 3, todos três conjuntos amostras, valores polaridade diminuem ligeiramente presença pHLIP comparado contraparte vesícula sem pHLIP, enquanto valores microviscosidade mostram aumento triplo, todas vesículas.

Bicamada further caracterizada medições anisotropia fluorescência outra sonda lipofílica DPH, incorporada lipídios. Medidas refletem movimento sonda orientação dentro bicamada dá informação fluidez bicamada pode afetar capacidade vesículas liberar conteúdo [29]. Valores anisotropia fluorescência inversamente proporcionais fluidez membrana. Portanto, alto valor anisotropia fluorescência corresponde alta ordem estrutural e/ou baixa fluidez membrana, como fase líquido-ordenada [30].

Valores anisotropia cada amostra mostrados Tabela 3. Dados indicam presença DSPE-pHLIP vesículas aumenta fluidez membrana, desde anisotropia fluorescência diminuiu. Bem sabido fluidez bicamada afetada não apenas ordem organização lateral cadeias apolares mas também grupos cabeça polares [31]. Resultados SAXS três diferentes sistemas mostram moléculas DSPE-pHLIP afetam principalmente região grupos cabeça, eventualmente causando empacotamento diferente cabeças polares. Resultados estruturais parecem combinar propriedades microreológicas bicamadas presença DSPE-pHLIP associado revelado inserção duas sondas diferentes. Resultados mostram microviscosidade aumentada revelada pireno, sonda poderia inserir próximo região externa (log P pireno 4,88). Por outro lado, DPH assumido embutido núcleo bicamadas, orientado paralelo eixo acil lipídio ou restrito centro bicamada, paralelo superfície. Largamente sensível reorientação angular cadeias acil anfifílicas [39]. Fluidez aumentada, revelada DPH, poderia relacionada tanto efeito inserção cadeias DSPE entre outras cadeias acil quanto efeito partição pHLIP região grupos cabeça polares, mudando propriedades empacotamento surfactantes. (Fig. 3).

Estudos caracterização further conduzidos preparações examinadas. Todas amostras, preparadas com sem pHLIP, armazenadas 90 dias 4 °C temperatura avaliar estabilidade vesículas tempo, medindo variações tamanho ζ-potencial (Arquivo Adicional 1: Figura S2). Variações significativas tamanho ζ-potencial observadas ao longo experimento; portanto, todas preparações examinadas resultaram estáveis se armazenadas 4 °C temperatura.

Além, estabilidade amostras examinada presença 90% (v/v) soro humano armazenado 37 °C 3 h (Arquivo Adicional 1: Figura S3).

Contato soro humano, vesículas Tween20 mostraram aumento tamanho, embora permaneceu abaixo 300 nm. Tamanho valores PDI medidos constantes ao longo experimento 3-h, sugerindo vesículas suspensão permaneceram intactas todo experimento.

Ambas amostras Span20 contato soro humano mostraram aumento tamanho, especialmente preparação com pHLIP, enquanto valores PDI sugerem distribuição tamanho homogênea (dados não mostrados). Evento pode devido absorção proteínas plasmáticas superfície niossomais, resultado interações eletrostáticas, porém sem incorrer disrupção vesículas. Hipótese apoiada diminuição ζ-potencial após vesículas contato soro humano. Fenômeno ocorre quando ζ-potencial atinge valores ligeiramente negativos, região neutralidade, tornando sistema instável, vesículas começam agregar.

Assim como Tween20, vesículas DMPC mostram aumento tamanho comparação amostra pré-contato. No entanto, variação tornou-se não-significativa valores tamanho mantidos 280 nm (DMPC) ou 240 nm (DMPC + pHLIP).

Capacidade liberação avaliada amostras preparadas com sem pHLIP seguindo quantidade calcina (sonda hidrofílica) liberada vesículas ao longo tempo.

Estudos realizados temperatura 37 °C período tempo 24 h, expondo amostras purificadas tampão HEPES ou soro humano. Mostrado Fig. 4, perfis liberação calcina resultam muito similares ambos Tween20 Tween20-pHLIP tampão HEPES ou soro humano.

Quantidade liberada calcina entre 30 50% indicando nenhuma diferença capacidades liberação amostras preparadas com sem pHLIP.

Mesmos resultados obtidos amostras Span DMPC (dados não mostrados).

Perfis liberação comparáveis relatados diferentes nanocarreadores responsivos estímulos, como cubossomos termo-sensíveis [40] ou nanocarreadores auto-montados poliméricos (SANs) [41, 42].

Conclusão, diferenças físico-químicas observadas termos microviscosidade fluidez amostras preparadas com sem pHLIP (Tabela 3) não afetam capacidades liberação (Fig. 4), evidência que inserção moléculas DSPE-pHLIP afeta principalmente região grupos cabeça. Estes dados concordam resultados previamente relatados mostrando pH neutro alto, pHLIP ligado superfície lipossomos feitos 1-Palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC) não induz fusão vazamento membrana.

Conclusão

Este estudo confirma possibilidade preparar vesículas decoradas pHLIP. Amostras estáveis se armazenadas 4 °C temperatura pelo menos 3 meses presença soro. Além, nanovetores propostos capazes aprisionar sonda hidrofílica modular sua liberação.

Vesículas pHLIP completamente caracterizadas obter compreensão fundamental características nanocarreadores facilitar design racional nanovetores sensíveis acidez.

Associação pHLIP impulsionada interação hidrofóbica cadeias C18 DSPE conjugadas inserindo região hidrofóbica nanovetor. Peptídeo pHLIP ancorado encontra região grupos cabeça externos, propenso interagir membranas alvo pH ácido e/ou liberar conteúdo nanovetor após rearranjo bicamada ambiente baixo pH.

Segundo estes achados, vesículas decoradas pHLIP propostas poderiam úteis obter liberação prolongada (modificada) substâncias biologicamente ativas direcionando tumores outros tecidos doentes ácidos.

Abreviações

Chol:

Colesterol

Cryo-TEM:

Microscopia eletrônica transmissão criogênica

DLS:

Espalhamento luz dinâmico

DMPC:

1,2-Dimistoil-sn-glicero-3-fosfocolina

DPH:

Difenilhexatrieno

pHLIP:

Peptídeo inserção pH (baixo)

SAXS:

Espalhamento raio-X pequeno ângulo

Span20:

Sorbitano monolaurato

Tween20:

Polioxietilenesorbitano monolaurato