Fabricação Fácil de Microesferas rGO@Fe3O4 para Quimioterapia-Fototermal Combinada contra Câncer com Direcionamento Magnético e Resposta a NIR

Resumo

Microesferas ocas de grafeno decoradas com Fe₃O₄ (rGO@Fe₃O₄) foram preparadas por um método facilitado de secagem por spray e coprecipitação para quimioterapia-fototermal combinada com direcionamento magnético e resposta a infravermelho próximo (NIR). As microesferas exibiram área de superfície específica muito alta (~ 120,7 m² g⁻¹) e grande volume de poros (~ 1,012 cm³ g⁻¹), demonstrando vantagens distintas para alta capacidade de carga de DOX (~ 18,43%). O efeito fototérmico desencadeado por NIR das microesferas rGO@Fe₃O₄ respondeu de maneira ligada-desligada e induziu alta eficiência de conversão fototérmica. Além disso, o Fe₃O₄ nas microesferas exibiu excelente capacidade de direcionamento a células tumorais. O tratamento quimio-fototérmico baseado em rGO@Fe₃O₄/DOX mostrou citotoxicidade superior para células HeLa in vitro. Nossos estudos indicaram que as microcápsulas rGO@Fe₃O₄/DOX têm grande potencial no tratamento combinado de câncer.

Introdução

O câncer é uma das doenças mais malignas do mundo e uma das principais causas de morte humana. Embora a quimioterapia seja comumente usada no tratamento clínico do câncer, várias questões-chave, incluindo baixa eficiência terapêutica e efeitos colaterais extensos, limitam seriamente sua aplicação. Sistemas de liberação de fármacos (SLF) têm mostrado grandes vantagens no aumento da solubilidade, biodisponibilidade e acúmulo tumoral dos fármacos, o que deve melhorar proeminentemente sua eficiência antitumoral. Recentemente, microesferas ocas empregadas como sistemas de liberação de fármacos ganharam atenção crescente devido à sua grande área de superfície e estruturas porosas abundantes.

Óxido de grafeno (GO), um novo tipo de material inorgânico livre de metal, tem sido amplamente investigado na liberação de fármacos devido às suas características únicas, como boa biocompatibilidade, baixo custo e preparação simples. Notavelmente, o óxido de grafeno pode transformar efetivamente luz em calor quando acionado por irradiação NIR, tornando-se uma estratégia promissora para melhorar o efeito da terapia fototérmica do câncer. No entanto, as nanofolhas 2D de óxido de grafeno tendem a aglomerar devido à grande área de superfície específica e às ligações de van der Waals entre as camadas de grafeno, resultando em baixa solubilidade em água e diminuição da capacidade de carga de fármacos.

Embora muitos sistemas de liberação de fármacos relatados tenham exibido capacidade superior de carga e liberação controlada, suas pesquisas pré-clínicas e aplicações também são limitadas devido à especificidade insuficiente para direcionar tecidos tumorais. Entre vários sistemas de entrega direcionada, Fe₃O₄, um material de direcionamento magnético, é amplamente usado na terapia do câncer por suas altas respostas magnéticas, qualidade estável e fácil obtenção.

No presente estudo, relatamos uma estratégia avançada para desenvolver uma plataforma de SLF compreendendo microesferas ocas de rGO decoradas com óxido de ferro (rGO@Fe₃O₄) para terapia fototérmica (PTT) com direcionamento magnético e acionada por NIR. As microesferas ocas rGO@Fe₃O₄ foram preparadas em três etapas: síntese de rGO-SiO₂ por secagem por spray usando SiO₂ como template, obtenção de microesferas ocas de rGO por remoção de SiO₂ com gravação por HF, e ancoragem de nanopartículas de Fe₃O₄ nas microesferas ocas de rGO por coprecipitação. Neste sistema, o rGO serve como agente PTT acionado por NIR, e o Fe₃O₄ oferece propriedade de direcionamento magnético para células HeLa. A doxorrubicina (DOX) encapsulada nas microesferas (rGO@Fe₃O₄/DOX), baseada em adsorção por poros e empilhamento π-π, espera-se que exiba capacidade de carga ultra-alta e comportamento de liberação de fármaco responsivo a pH, podendo aumentar significativamente o efeito anticancerígeno pela combinação de fototermia-quimioterapia.

Materiais e Métodos

Materiais

Cloreto de ferro hexahidratado (FeCl₃·H₂O), hidróxido de sódio (NaOH) e sulfato ferroso heptahidratado (FeSO₄·7H₂O) foram adquiridos da Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. Células HeLa são do Hospital de Câncer de Tianjin. Salina fosfatada tamponada (PBS), cloridrato de doxorrubicina (DOX·HCl), meio essencial mínimo de Dulbecco (DMEM), 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) e kit de contagem celular-8 (CCK-8) foram adquiridos da Solarbio Science and Technology Co., Ltd. SiO₂ (~ 300 nm) foi adquirido da Shanghai Yuanjiang Chemical Company. Solução aquosa de óxido de grafeno (2 mg/ml) foi um produto comercial da Nanjing Xianfeng Company.

Preparação das Microesferas rGO@Fe₃O₄

Microesferas ocas de grafeno foram preparadas via método de secagem por spray usando SiO₂ (300 nm) como template. Brevemente, 100 mL de suspensão de SiO₂ (50 mg mL⁻¹) foi lentamente adicionada a 300 mL de solução aquosa de GO (2 mg mL⁻¹) sob agitação vigorosa, a mistura foi secada por spray a 200 °C. Subsequentemente, o produto foi mantido a 300 °C sob proteção de Ar por 2 h, obtendo-se rGO-SiO₂. Para remover SiO₂, o rGO-SiO₂ foi colocado em solução de HF (10%) por 48 h a 60 °C. O produto sólido foi lavado várias vezes e seco em estufa a vácuo a 60 °C por 12 h, obtendo-se rGO com rendimento de 75%.

As nanopartículas rGO@Fe₃O₄ foram preparadas via método de coprecipitação. Em um processo típico, 0,27 g FeCl₃·H₂O, 0,28 g FeSO₄·7H₂O e 0,1 g de microesferas ocas de rGO foram dissolvidos em 10 mL de água desionizada e agitados por 30 min a 50 °C. Então, 60 mL de NaOH (0,15 mol L⁻¹) foi adicionado lentamente sob agitação contínua a 50 °C por 12 h. Os produtos foram finalmente separados magneticamente e lavados repetidamente com água desionizada e etanol várias vezes, seguido de secagem a 60 °C sob vácuo por 12 h.

Caracterização Estrutural

O tamanho e morfologia das amostras foram analisados usando microscopia eletrônica de varredura de emissão de campo (FE-SEM, Hitachi, S-4800) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM, JEM2100F, JEOL). A composição dos produtos foi analisada via sistema de difração de raios X (XRD, D8 Focus, radiação Cu Ka, Bruker, Alemanha) a uma taxa de varredura de 12 °/min na faixa de 10 a 80°. Espectroscopia de fotoelétrons de raios X (XPS) foi realizada em espectrômetro XPS (Thermo Fisher Scientific, ESCALAB 250Xi, EUA). Espectros FTIR foram registrados de 500 a 4000 cm⁻¹ com resolução de 4 cm⁻¹. Medidas magnéticas foram realizadas usando um dispositivo de interferência quântica supercondutor (SQUID, Quantum Design MPMS) magnetômetro à temperatura ambiente (300 K). Espectros Raman foram coletados usando espectroscópio Raman (Renishaw, inVia Reflex, Inglaterra) com laser de comprimento de onda 532 nm. O teor de rGO foi avaliado usando analisador termogravimétrico (TGA, TA Instruments-water LLC, SDTQ-600). A área de superfície específica foi medida usando a técnica Brunauer-Emmett-Teller (BET). Espectros UV-Vis foram registrados usando analisador de ácido nucleico/proteína Beckman DU 800 (Beck-man Instruments, Inc., Rosemead, CA).

Carga e Liberação de DOX

DOX, um fármaco quimioterápico modelo, foi encapsulado nos núcleos de rGO@Fe₃O₄ para avaliar os comportamentos de carga e liberação de fármacos anticancerígenos in vitro. O rGO@Fe₃O₄/DOX foi preparado conforme referência anterior. Brevemente, 10 mL (0,2 mg mL⁻¹) de solução aquosa de DOX foi adicionada a 10 mg de solução de rGO@Fe₃O₄, a mistura foi homogeneizada ultrassonicamente para garantir ausência de precipitação significativa. A mistura foi equilibrada em agitador recíproco (SK-O180-Pro) a 150 rpm por 24 h. Após centrifugação a 6000 rpm por 10 min, DOX não carregado foi removido, o sobrenadante de rGO@Fe₃O₄/DOX foi medido via espectrofotômetro UV-Vis para determinar a quantidade de DOX carregada. O OD do DOX foi registrado a 490 nm, usando as equações para calcular eficiência de carga (LE) e capacidade de carga (LC).

Os estudos de liberação in vitro de DOX foram realizados colocando rGO@Fe₃O₄/DOX (10 mg) em bolsa de diálise (MWCO = 1000) com salina fosfatada tamponada (PBS, 30 mL) a pH 5,4, 6,5 ou 7,4, colocando em banho-maria a 37 °C e agitando a 80 rpm. Em intervalos predeterminados, 3 mL do meio de liberação foi coletado e a quantidade de DOX liberado foi calculada medindo UV-Vis a 480 nm.

Efeito Fototérmico Acionado por NIR das Microesferas rGO@Fe₃O₄

Para monitorar a influência da dose de rGO@Fe₃O₄ no efeito fototérmico acionado por NIR, soluções de rGO@Fe₃O₄ com diferentes concentrações (0,0625, 0,125, 0,25, 0,5 e 1 mg mL⁻¹) foram irradiadas com laser NIR a 2 W cm⁻² por 5 min, respectivamente. Além disso, a influência da energia NIR no efeito fototérmico foi avaliada irradiando rGO@Fe₃O₄ (0,25 mg mL⁻¹) com diferentes potências (1 W cm⁻², 1,5 W cm⁻², 2 W cm⁻²) por 5 min. A temperatura em tempo real foi medida usando câmera termográfica infravermelha FLIR I5.

Captação In Vitro

Células HeLa foram semeadas em pratos de confocal de 35 mm² a uma densidade de 1 × 10⁵ células/poço. Após incubação por 24 h em incubadora (5% CO₂, 37 °C), o meio foi removido, e meio fresco contendo microesferas rGO@Fe₃O₄/DOX e rGO@Fe₃O₄/DOX com ímã foram adicionados e cultivados por mais 5 h. A concentração de rGO@Fe₃O₄/DOX foi 0,1 mg mL⁻¹. As células foram então lavadas três vezes com PBS frio (pH = 7,4) e fixadas com solução de paraformaldeído a 4% por 20 min (CLSM, TCSSP5II, Leica, Ernst-Leitz-Strasse, Alemanha).

Ensaio de Viabilidade Celular

A citotoxicidade dessas microesferas foi avaliada por ensaio CCK-8 após tratamento NIR. Células HeLa foram semeadas em placas de 96 poços (5 × 10³ células/poço) em 100 μL do meio e cultivadas em 5% CO₂ a 37 °C por 24 h. Para avaliação de biocompatibilidade, rGO@Fe₃O₄ foram adicionados aos poços com faixa de concentração de 0,01 a 0,2 mg mL⁻¹; para grupo de fototermia única, rGO@Fe₃O₄ foi adicionado com faixa de concentração de 0,01 a 0,2 mg mL⁻¹, aplicando irradiação de luz NIR por 10 min (2 W cm⁻², 808 nm); para grupo de quimioterapia-fototermia combinada, rGO@Fe₃O₄/DOX foi adicionado com faixa de concentração de 0,01 a 0,2 mg mL⁻¹, aplicando iluminação NIR por 10 min (2 W cm⁻², 808 nm). As células foram incubadas por mais 24 h ou 48 h. Posteriormente, as células foram lavadas com PBS e incubadas em 100 μL de meio DMEM contendo 10 μL de solução CCK-8 por mais 40 min. A viabilidade foi detectada usando leitor de microplacas a comprimento de onda de 450 nm. Todos os experimentos foram conduzidos em triplicata.

Resultados e Discussão

Síntese e Caracterização Morfológica

A preparação das microesferas rGO@Fe₃O₄ foi realizada em três etapas. Primeiro, microesferas rGO-SiO₂ foram sintetizadas por secagem por spray usando SiO₂ como template. A morfologia foi caracterizada por SEM e TEM. As microesferas rGO-SiO₂ com diâmetros de 3 μm exibiram forma esférica uniforme e compreendiam muitas nanopartículas de SiO₂ aglomeradas (~ 300 nm). Dados de TEM e diâmetro hidrodinâmico medido por espalhamento dinâmico de luz confirmaram os resultados. Em seguida, microesferas ocas de rGO foram obtidas pela remoção de SiO₂ do rGO-SiO₂ com aquecimento a 300 °C e gravação por HF. Poros óbvios com tamanho de poro de cerca de 300 nm puderam ser observados devido à dissolução de SiO₂. Finalmente, nanopartículas de Fe₃O₄, em virtude da capacidade de direcionamento magnético, foram decoradas nas microesferas porosas de rGO pelo método de coprecipitação. A observação por SEM e TEM ilustrou que houve diminuição notável do tamanho de poro após carga de Fe₃O₄, fornecendo viabilidade para entrega de fármaco e liberação controlada. Notavelmente, o tamanho de partícula e distribuição de tamanho hidrodinâmico de rGO-SiO₂, rGO, rGO@Fe₃O₄ não tiveram mudanças visíveis durante esses tratamentos.

Caracterização Estrutural e Composicional

Para confirmar a preparação bem-sucedida de rGO@Fe₃O₄, SEM com EDS foi empregado para investigar estrutura e composição. As imagens EDS de rGO@Fe₃O₄ foram caracterizadas visualizando elétrons espalhados inelastically nas janelas de perda de energia para elementos O, Fe e C, e as diferentes áreas coloridas representam locais enriquecidos em O, Fe e C nas estruturas reais, respectivamente. Fe e O foram amplamente distribuídos nas microesferas rGO@Fe₃O₄ com alta densidade de carga. Imagens de difração eletrônica de área selecionada (SAED) verificaram a presença de Fe₃O₄ no rGO. Os picos apareceram em 220, 311, 400, 511 e 440 correspondentes a Fe₃O₄ também foram detectados nos espectros XRD, consistentes com resultados SAED. Resultado XPS mostrou picos predominantes em 725,9/724,5 eV e 714,1/711,0 eV, correspondentes a Fe2p_1/2 e Fe 2p_3/2 do rGO@Fe₃O₄, indicando coexistência de Fe³⁺ e Fe²⁺ em Fe₃O₄. Análise termogravimétrica (TGA) monitorou o comportamento de degradação térmica do rGO em microesferas rGO@Fe₃O₄, com teor de carbono calculado de 25,6% em peso.

As propriedades magnéticas das microesferas rGO@Fe₃O₄ foram investigadas usando SQUID. O valor de magnetização de saturação (Ms) e campo coercitivo (Hc) do Fe₃O₄ são 66,6 emu g⁻¹ e 9,3 Oe. Após carregar Fe₃O₄ no rGO, os valores Ms e Hc das microesferas rGO@Fe₃O₄ diminuíram para 33,9 emu g⁻¹ e 7,44 Oe. A notável diminuição na saturação magnética pode ser atribuída às propriedades diamagnéticas do rGO. Além disso, a capacidade de aglomeração seletiva das microesferas rGO@Fe₃O₄ foi realizada intuitivamente por experimento de separação magnética. As suspensões de Fe₃O₄ e microesferas rGO@Fe₃O₄ foram colocadas em frasco com ímã externo por 2 min, as suspensões concentraram-se no lado do ímã e a solução aquosa tornou-se transparente. Quando o ímã foi retirado, as microesferas rGO@Fe₃O₄ dispersaram-se uniformemente novamente após agitação lenta, indicando que as microesferas rGO@Fe₃O₄ mantêm a vantagem de boa capacidade de dispersão em água. A excelente capacidade de dispersão em água e propriedade de resposta magnética pavimentaram o caminho para a aplicação de direcionamento magnético do rGO@Fe₃O₄ como carreadores de fármacos no tratamento do câncer.

Análise do Efeito Fototérmico

Considerando a penetração mais profunda no tecido e menor dano aos tecidos circundantes do NIR, a terapia fototérmica responsiva a NIR foi frequentemente empregada no tratamento de tumores. Portanto, o comportamento de transformação fototérmica de soluções aquosas de rGO@Fe₃O₄ em diferentes concentrações e densidades de potência foram registrados sob irradiação de laser NIR a 808 nm por 5 min. O aumento de temperatura de rGO@Fe₃O₄ foi altamente dependente da concentração e densidade de potência do laser. Quando a concentração das microesferas chegou a 1 mg mL⁻¹, a temperatura subiu de 27,9 a 70,3 °C sob irradiação NIR por 5 min a 2 W cm⁻², enquanto a temperatura do grupo PBS subiu apenas de 31,7 a 36,2 °C. A alta eficiência de conversão fototérmica de rGO@Fe₃O₄ terá grande potencial para terapia fototérmica de tumor, segundo relatos de que degeneração proteica e dano de DNA em células ocorrerão upon exposição a 50 °C por 4 a 6 min. Para exibir intuitivamente o comportamento de transformação fototérmica de rGO@Fe₃O₄, termografia IR foi realizada. A solução de rGO@Fe₃O₄ com concentração de 1 mg mL⁻¹ aumentou rapidamente para 70,3 °C após irradiação NIR por 5 min, enquanto o grupo água não teve mudanças óbvias, consistente com resultados de termometria. Além disso, a estabilidade fototérmica do rGO@Fe₃O₄ foi estudada realizando procedimento laser ligado/desligado com laser 808 nm a 2 W cm⁻² por seis ciclos. O aumento de temperatura idêntico foi obtido, indicando perfeita estabilidade fototérmica NIR dos compostos rGO@Fe₃O₄. Estes resultados demonstraram que as microesferas rGO@Fe₃O₄ têm grande promessa como agente fototérmico para terapia fototérmica no câncer.

Carga e Liberação de Fármaco

A área de superfície e tamanho de poro de rGO@Fe₃O₄ foram avaliados por análises BET e BJH. Curva de adsorção-desorção de N₂ tipo isotérmico IV, e a área de superfície e tamanho de poro foram 120,7 m² g⁻¹, 2-8 nm e 1,012 cm³ g⁻¹, respectivamente. Os resultados mostraram que rGO@Fe₃O₄ possuía canais mesoporosos e distribuição média de tamanho de poro, exibindo grande potencial para carga de fármacos antitumorais. Então, as microesferas rGO@Fe₃O₄ com estrutura porosa serviram para carregar fármaco quimioterápico modelo doxorrubicina por simples mistura e sonicação leve. A análise ATR-FTIR verificou a incorporação estável de DOX no rGO@Fe₃O₄ devido à ressonância característica dos grupos -COOH e benzeno do DOX a 1726 cm⁻¹ e 1618 cm⁻¹. Observação por microscopia eletrônica de varredura (SEM) mostrou que os novos sinais de elementos N atribuídos ao DOX distribuíram-se uniformemente na microesfera após carga de DOX. Além disso, a eficiência de carga (LE) e capacidade de carga (LC) de rGO@Fe₃O₄/DOX foram 92,15% e 18,43%, respectivamente. As notavelmente maiores LCs de rGO@Fe₃O₄/DOX que muitos carreadores de fármacos podem ser atribuídas a áreas de superfície extremamente altas e tamanhos de poro. A alta LE de rGO@Fe₃O₄/DOX pode ser atribuída a dois aspectos: interação forte por empilhamento π-π entre ligações π sp²-hibridizadas do rGO@Fe₃O₄ e porção quinona do DOX, e formação de ligações de hidrogênio entre grupos ácido carboxílico (–COOH), hidroxila (–OH) do rGO@Fe₃O₄ e grupos amina (–NH₂), hidroxila (–OH) do DOX. Em seguida, monitoramos comportamento de liberação de DOX em PBS a pH 7,4, 6,5 e 5,4, para imitar ambientes extracelulares de tecidos tumorais e normais. A taxa de liberação de DOX acelerou quando o pH foi ajustado de 7,4 para 5,4, e a liberação sustentada de DOX a pH 5,4 chegou a 73% após 98 h. Portanto, o perfil de liberação cumulativa de DOX do rGO@Fe₃O₄ exibiu modo dependente de pH. Esta liberação acelerada sob condições ácidas pode ser devido à protonação parcial dos grupos hidroxila e amina do DOX, levando a maior solubilidade do fármaco e enfraquecimento de ligações de hidrogênio entre DOX e grafeno. Além disso, estudamos comportamento de liberação de DOX responsivo a NIR in vitro. A liberação de DOX foi acelerada por radiação NIR e a taxa de liberação chegou a 85%. Este comportamento responsivo a estímulos de pH e NIR desempenha papel importante na entrega eficaz de fármacos ao sítio tumoral.

Captação Celular In Vitro

Para verificar a capacidade de direcionamento magnético de Fe₃O₄ na microesfera rGO@Fe₃O₄, experimentos de captação celular com ou sem tratamento de campo magnético foram investigados qualitativamente por microscopia confocal de varredura a laser (CLSM). Células HeLa foram incubadas com rGO@Fe₃O₄/DOX por 4 h e os núcleos de HeLa foram corados por DAPI. Os resultados mostraram que manchas pretas correspondentes a microesferas rGO@Fe₃O₄ e sinais de fluorescência vermelha intracelulares óbvios atribuídos a DOX foram observados no grupo rGO@Fe₃O₄ com tratamento de campo magnético. Em contraste, houve menos manchas pretas e fluorescência de DOX mais fraca no grupo rGO@Fe₃O₄ sem carregamento de campo magnético. A explicação pode ser que a mancha preta atribuída a rGO@Fe₃O₄ internalizada na célula pode ser promovida por ímã. Os resultados indicam que Fe₃O₄ em rGO@Fe₃O₄/DOX pode direcionar especificamente células HeLa eficientemente e aumentar significativamente a internalização celular das microesferas, demonstrando capacidade favorável de direcionamento magnético do sistema de entrega de fármacos na terapia do câncer.

Análises de Citotoxicidade In Vitro

A biocompatibilidade de rGO@Fe₃O₄ foi avaliada usando ensaio CCK-8 para células HeLa. Após incubação com rGO@Fe₃O₄ em ampla faixa de concentrações, a viabilidade celular também foi superior a 90% mesmo em altas concentrações até 200 μg mL⁻¹, indicando que rGO@Fe₃O₄ exibe alta biocompatibilidade e pode servir como plataforma eficiente de entrega de fármacos. A eficácia da terapia fototérmica de rGO@Fe₃O₄ foi investigada após incubação com células HeLa por 24 h e 48 h sob irradiação de luz NIR (laser NIR 808 nm, 10 min). A fototoxicidade foi claramente dependente de dose upon estimulação NIR, e a viabilidade celular diminuiu de 90,37 para 35,52% em 24 h, e de 93,77 para 31,75% em 48 h, implicando que rGO@Fe₃O₄ teve excelente fototoxicidade e grande promessa em terapia fototérmica. Para estimar a eficácia terapêutica sinérgica de fototermia-quimioterapia, a citotoxicidade de rGO@Fe₃O₄/DOX para células HeLa com e sem irradiação NIR foi estudada. A viabilidade celular mostrou modo dependente de concentração e controlado por tempo. Aproximadamente 65% e 80% de células HeLa foram mortas por rGO@Fe₃O₄/DOX sem irradiação NIR e DOX em 24 h, a capacidade reduzida de morte tumoral de rGO@Fe₃O₄/DOX comparado ao DOX livre pode ser devida ao comportamento de liberação retardada de DOX das microesferas rGO@Fe₃O₄/DOX. Após irradiação de laser NIR (laser NIR 808 nm, 10 min), grupo rGO@Fe₃O₄/DOX com laser matou mais de 86% das células a dose equivalente de DOX (30 μg mL⁻¹). Resultados similares observados após mesmo tratamento por 48 h, a diminuição na viabilidade celular de DOX, rGO@Fe₃O₄/DOX, grupo rGO@Fe₃O₄/DOX com irradiação NIR foi 80%, 76% e 90%, respectivamente, indicando efeito sinérgico da terapia fototérmica e quimioterapia combinadas.

Conclusões

Em resumo, exploramos uma estratégia facilitada para construir plataforma de entrega de fármacos baseada em rGO rGO@Fe₃O₄/DOX para quimioterapia-fototermia sinérgica. Microesferas rGO@Fe₃O₄/DOX exibiram excelente efeito PTT acionado por NIR e perfeita estabilidade fototérmica NIR. O Fe₃O₄ nas microesferas garantiu excelente capacidade de direcionamento a células tumorais. DOX pôde ser encapsulado em rGO@Fe₃O₄ com capacidade de carga ultra-alta e comportamento de liberação de fármaco responsivo a pH pôde ser alcançado simultaneamente. Além disso, eficiência antitumoral aumentada foi alcançada quando combinação de quimioterapia e terapia fototérmica. Portanto, esta plataforma de entrega de fármacos multifuncional pode ser candidata promissora para direcionamento tumoral e terapia combinada de câncer no futuro.