Microesferas de Fosfato de Cálcio Yolk-Shell de Alta Área Superficial de Fontes Orgânicas de Fósforo e Cálcio para Adsorção Aprimorada de HEL

Resumo

Microesferas de fosfato de cálcio com estrutura yolk-shell (gema-casca) têm grande potencial para aplicações médicas devido às suas excelentes propriedades físico-químicas e biocompatibilidade. No entanto, desenvolver fosfato de cálcio com estrutura yolk-shell com alta capacidade de adsorção permanece um desafio. Neste trabalho, uma microesfera porosa de fosfato de cálcio com estrutura yolk-shell (ATP-CG) com alta área superficial específica [SBET = 143 m²/g, que é aproximadamente três vezes maior que a de microesferas ATP-CL sintetizadas substituindo a fonte de cálcio por lactato de cálcio L-pentahidratado (CL)] foi sintetizada com sucesso usando sal dissódico de adenosina 5'-trifosfato (ATP) como fonte de fósforo e gluconato de cálcio monoidratado (CG) como fonte de cálcio através de uma abordagem de auto-templating. As influências da razão molar de Ca para P (Ca/P), temperatura hidrotérmica e tempo na morfologia das microesferas ATP-CG também foram investigadas. Verificou-se que a fonte orgânica de cálcio e a fonte orgânica de fósforo desempenham papel vital na formação da estrutura yolk-shell. Além disso, um lote de experimentos de adsorção foram investigados para elucidar o mecanismo de adsorção de dois tipos de microesferas com estrutura yolk-shell sintetizadas com diferentes fontes de cálcio. Os resultados mostram que a capacidade de adsorção das microesferas ATP-CG (332 ± 36 mg/g) é cerca de duas vezes maior que a das microesferas ATP-CL (176 ± 33 mg/g). Além disso, a maior área superficial específica causada pela fonte de cálcio e propriedades químicas de superfície únicas para microesferas ATP-CG desempenham papel importante na melhoria da capacidade de adsorção de HEL. O estudo indica que a microesfera com estrutura yolk-shell preparada é promissora para aplicação em campos de liberação de fármacos e fornece uma abordagem eficaz para melhorar a capacidade de adsorção de fármacos.

Introdução

Fosfato de cálcio ganhou considerável atenção nos últimos anos devido à sua excelente biocompatibilidade, alta capacidade de carga e eficiência de liberação. Biomateriais relacionados a fosfato de cálcio têm sido amplamente usados em vários campos biomédicos, como engenharia de tecidos, reparo ósseo e liberação de fármacos. Para estender a faixa de aplicação e melhorar o desempenho de materiais baseados em fosfato de cálcio, vários materiais de fosfato de cálcio com variedades de morfologias e microestruturas incluindo microesferas de hidroxiapatita carbonatada (HAp), microtuos de HAp, microesferas ocas de HAp, nanoesferas mesoporosas yolk@cage-shell de fosfato de cálcio amorfo (ACP) têm sido relatados.

Entre várias morfologias, microesferas com estrutura yolk-shell têm atraído cada vez mais atenções, pois não são apenas materiais de fronteira da ciência de materiais mas também mostram características morfológicas únicas. Em microesferas com estrutura yolk-shell, o espaço vazio entre núcleo de gema e casca pode servir como reservatório de armazenamento para várias cargas e a casca com estrutura porosa pode fornecer via de difusão para moléculas convidadas, o que as torna com grande potencial para aplicações diversas incluindo catálise, baterias de íon-lítio, fotocatálise e biomedicina. Tradicionalmente, métodos de templado sacrificial são os primários para preparar microesferas com estrutura yolk-shell. Estas estratégias de templado alcançaram grande sucesso no ajuste da estrutura e propriedades. No entanto, estas abordagens apresentam algumas desvantagens. Por exemplo, etapas de processamento tediosas e surfactantes ou reagentes diretores de estrutura, que podem ser perigosos para a saúde humana. Atualmente, métodos de auto-templating têm sido amplamente usados na pesquisa de microesferas com estrutura yolk-shell. Diferente das abordagens de templado tradicionais, os templates empregados em abordagens de auto-templating não são apenas os templates para formar os vazios, mas também o precursor de microesferas com estrutura yolk-shell. Assim, métodos de auto-templating são abordagens convenientes para preparar microesferas com estrutura yolk-shell. No entanto, a introdução de abordagens de auto-templating à síntese de microesferas de fosfato de cálcio com estrutura yolk-shell permanece um desafio interessante.

Além disso, materiais de fosfato de cálcio têm sido utilizados para carregar diferentes tipos de cargas como proteínas, DNA e siRNA. No entanto, a pobre capacidade de adsorção de fármacos do fosfato de cálcio precisa ser resolvida urgentemente. Geralmente, as abordagens de imobilização de moléculas de fármaco sobre a superfície do carreador dependem das propriedades de superfície contendo potencial de superfície, hidrofobicidade/hidrofilicidade, ligação de hidrogênio e área superficial específica. Então, melhorar propriedades de superfície e área superficial específica é uma abordagem válida para aumentar a capacidade de adsorção de fármacos do carreador.

Aqui, preparamos um tipo de microesferas porosas de fosfato de cálcio com estrutura yolk-shell usando sal dissódico de adenosina 5'-trifosfato (ATP) como fonte de fósforo e gluconato de cálcio monoidratado (CG) como fonte de cálcio através de abordagem de auto-templating. Sem qualquer adição de agente de templado, as microesferas de fosfato de cálcio com estrutura yolk-shell preparadas exibem área superficial específica particularmente alta. Além disso, o comportamento de adsorção de lisozima de ovo de galinha (HEL) de microesferas ATP-CG foi investigado em comparação com microesferas ATP-CL preparadas substituindo a fonte de cálcio por lactato de cálcio L-pentahidratado (CL). Os resultados revelam que a diferença de área superficial específica causada pela fonte de cálcio e propriedades químicas de superfície desempenham papel vital na melhoria da capacidade de adsorção de HEL.

Métodos

Materiais

Sal dissódico de adenosina 5'-trifosfato (ATP) foi obtido da Macklin Biochemical Co., Ltd (Xangai, China). Gluconato de cálcio monoidratado (CG) e lactato de cálcio (L)-pentahidratado (CL) foram adquiridos da Sangon Biotech Co., Ltd (Xangai, China). A lisozima de ovo de galinha (HEL, ~70000 U/mg) foi comprada da Sigma-Aldrich (Taufkirchen, Alemanha).

Síntese e Caracterização de Microesferas Yolk-Shell ATP-CG e ATP-CL

As microesferas de fosfato de cálcio com estrutura yolk-shell ATP-CG foram preparadas da seguinte forma: Em resumo, 0,9 g de CG foi dissolvido em 20 mL de água ultrapura para formar solução C a 60 °C e 0,11 g de ATP foi dissolvido em 5 mL de água ultrapura para formar solução P. Então, a solução C foi resfriada até temperatura ambiente e misturada com solução P sob agitação vigorosa e o pH da solução foi ajustado por solução de NaOH 2 M para 5. O volume final da solução foi 30 mL com a adição extra de água ultrapura e a razão molar de Ca para P (Ca/P) foi 3,3. A solução final foi transferida para um sistema de digestão por micro-ondas para reação hidrotérmica por micro-ondas e tratada a 120 °C por 15 min. Os precipitados resultantes foram coletados por centrifugação (4500 rpm, 10 min), enxaguados com água ultrapura e liofilizados por 48 h. As microesferas ATP-CL foram preparadas de acordo com procedimentos da literatura.

A fase cristalina das microesferas foi caracterizada por difração de raios X (XRD, fonte Cu Kα, λ = 0,154). A morfologia das microesferas foi observada por microscopia eletrônica de varredura (MEV), microscopia eletrônica de transmissão (MET) e MET de alta resolução (HRMET). As composições das microesferas foram estudadas por espectrofotômetro de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR). A área superficial específica das microesferas foi determinada por Brunauer-Emmett-Teller (BET). Análise termogravimétrica (TGA) foi empregada para estudar as propriedades térmicas das amostras a taxa de aquecimento de 10 °C/min em atmosfera de nitrogênio.

Adsorção de HEL e Caracterização

Os experimentos de adsorção de HEL de dois tipos de microesferas foram conduzidos da seguinte forma: certas quantidades de microesferas yolk-shell (ATP-CG, Ca/P = 3,3, 120 °C, 15 min, e ATP-CL, Ca/P = 2,5, 120 °C, 30 min) foram dispersas em água com tratamento ultrassônico constante por 10 min para formar suspensão de microesferas de 1,5 mg/mL. Então, 0,5 mL de soluções aquosas que contêm várias concentrações de HEL foram imediatamente adicionadas em 1 mL da suspensão acima e as concentrações finais de fármaco foram 1-7,5 mg/mL. Cada solução foi agitada (200 rpm) a 37 °C por 6 h. Depois, as soluções foram centrifugadas e as quantidades de HEL nos sobrenadantes foram medidas por espectrofotômetro UV-vis a 280 nm. Os potenciais zeta e composições das microesferas antes e após carregamento de fármaco foram caracterizados por analisador de potencial zeta, espectrômetro FTIR e analisador termogravimétrico (TGA, taxa de aquecimento 10 °C/min, atmosfera de nitrogênio).

Isoterma de Adsorção

Para investigar o comportamento de adsorção, o modelo de isoterma Dubinin-Radushkevic (D-R) foi conduzido em nosso estudo. O modelo D-R é baseado na teoria de preenchimento de microporos, que é usado para descrever a sorção não ideal em superfície heterogênea bem como distinguir o mecanismo de sorção (sorção física ou química). O modelo é expresso pela seguinte equação: onde Qeq é a capacidade de adsorção do adsorvente no equilíbrio (mg/g), Ceq é a concentração do adsorvato na fase aquosa no equilíbrio (mL/L). Qm é a capacidade máxima de adsorção. R é constante dos gases, 8,314 J/(mol·K). T é temperatura absoluta. E representa a energia livre média para estimar o tipo de adsorção. Se o valor de E está abaixo de 8 kJ/mol, o tipo de adsorção pode ser explicado por adsorção física, entre 8 e 16 kJ/mol, o tipo de adsorção pertence a troca iônica e maior que 16 kJ/mol, o tipo de adsorção pode ser descrito por adsorção química.

Análise Estatística da Adsorção de Fármaco

Dados foram apresentados como valor médio ± desvio padrão (DP). Diferenças significativas (p < 0,05) foram calculadas estatisticamente entre diferentes grupos usando ANOVA one-way. Todos os experimentos foram realizados em triplicata e dados foram analisados usando software DPS.

Resultados e Discussão

Morfologia e Caracterização Química das Microesferas

Microesferas Yolk-Shell ATP-CG

Imagens de MEV na Fig. 1 mostram as morfologias de várias amostras obtidas sob diferentes condições de reação. A t = 5 min ou 15 min, todos os produtos são compostos de microesferas uniformes. No entanto, quando o tempo hidrotérmico é further aumentado para 30 min, microesferas auto-montadas de nano-folhas foram formadas (como mostrado na Fig. 1 f, i, l). Enquanto isso, o efeito de Ca/P na morfologia dos produtos também é observado a t = 30 min. Com o aumento de Ca/P, as microesferas auto-montadas de nano-folhas foram gradualmente formadas (como mostrado na Fig. 1 f, i, l). A formação de microesferas auto-montadas de nano-folhas poderia ser explicada pelas seguintes razões. Primeiramente, sob o processo hidrotérmico por micro-ondas, moléculas de ATP poderiam hidrolisar para formar moléculas baseadas em adenosina incluindo difosfato de adenosina (ADP), monofosfato de adenosina (AMP) e adenosina, e simultaneamente liberar íons fosfato (PO₄³⁻). Enquanto isso, moléculas de CG poderiam hidrolisar para formar gluconato e íons cálcio (Ca²⁺). Então, íons fosfato reagiriam com íons cálcio para formar núcleos primários de ACP. Então, os núcleos iniciais de ACP crescem e se montam para formar microesferas de ACP. Portanto, quando o tempo hidrotérmico é further estendido, as moléculas de ATP e CG em solução são further hidrolisadas e liberam mais íons PO₄³⁻ e Ca²⁺, o que causa a formação de microesferas auto-montadas de nano-folhas através do aumento da supersaturação do sistema e da taxa de nucleação. Além disso, ao aumentar o Ca/P, a alta concentração local de Ca²⁺ também acelera a transformação de morfologia dos produtos da mesma forma que acima. A análise acima indica que o tempo hidrotérmico e Ca/P têm influência importante na morfologia dos produtos.

Em seguida, os espectros FTIR de microesferas sintetizadas com vários Ca/P a 120 °C por 15 min são investigados (Fig. 2). Os picos a 1620 cm⁻¹, 1383 cm⁻¹ e 912 cm⁻¹ atribuídos aos picos característicos de C=O, C-O de CG e grupos P-O de ATP, respectivamente, implicando que moléculas de CG e ATP não hidrolisadas ou seus derivados são absorvidos na superfície das microesferas. O fraco pico característico do PO₄³⁻ de HAp está localizado a 1035 cm⁻¹ e os picos de absorção a 1122 cm⁻¹ e 567 cm⁻¹ são atribuídos a íons PO₄³⁻ de ACP, indicando que os produtos são compostos de ACP e HAp. Os resultados de FTIR sugerem que o fosfato de cálcio é preparado com sucesso usando ATP como fonte de fósforo e CG como fonte de cálcio.

Além disso, as imagens de MEV e MET de amostras sintetizadas com vários Ca/P através do método hidrotérmico por micro-ondas a 120 °C por 15 min são exibidas na Fig. 3. Quando o Ca/P é 0,8 ou 1,67, as amostras consistem de microesferas porosas (Fig. 3b, d). Quando o Ca/P é 2,5, a morfologia dos produtos começa a transformar para microesferas com estrutura yolk-shell (Fig. 3f). À medida que o Ca/P further aumenta para 3,3, os produtos são inteiramente compostos de microesferas com estrutura yolk-shell (Fig. 3h). Além disso, algumas esferas quebradas e os núcleos expostos das microesferas yolk-shell (inserção na Fig. 3g) são observados após fratura mecânica, fornecendo evidência de estrutura oca entre gema e casca. Baseado na observação acima, propomos tentativamente o mecanismo de formação de microesferas com estrutura yolk-shell sintetizadas com vários Ca/P. Quando o Ca/P é menor, microesferas porosas de ACP são formadas primeiro, o que é atribuído ao efeito de inibição de moléculas de ATP e CG ou seus derivados adsorvidos na superfície nas microesferas. Então, à medida que o Ca/P é further aumentado, o ACP metaestável further crescerá, o que é impulsionado pela alta supersaturação do sistema. Finalmente, HAp cristalinas são formadas na superfície externa, o que é confirmado pela imagem de HRMET de microesferas na Fig. 3i (a distância interplanar de 0,308 nm pode ser indexada a (210) de HAp). Como resultado, as estruturas ocas entre gema e casca são geradas devido à diferença de volume ou densidade entre HAp e ACP. O mapeamento EDS correspondente indica que os elementos Ca, P e O são uniformemente distribuídos através das microesferas. Os espectros EDS na Fig. 3k e espectro XPS na Fig. 3l revelam que os elementos químicos das microesferas incluem principalmente Ca, P e O, o que é consistente com o resultado de FTIR (Fig. 2).

O impacto do tempo e temperatura hidrotérmica assistida por micro-ondas na morfologia das microesferas sintetizadas com Ca/P = 3,3 é further investigado. Como mostrado na Fig. 4a-b, quando o tempo hidrotérmico é 5 min, as amostras são compostas de microesferas porosas. Como discutido acima, quando t = 15 min, o produto também é composto de microesferas com estrutura yolk-shell (Fig. 4c-d). Quando o tempo hidrotérmico é estendido para 60 min ou temperatura aumentada para 160 °C, feixes de folhas ou bastões são observados (Fig. 4e-l). A transformação de morfologia de porosa para yolk-shell para folha ou bastão é atribuída ao further crescimento de ACP com a hidrólise contínua de moléculas de ATP e CG em solução. Além disso, a hidrólise de moléculas de ATP e CG ou seus derivados adsorvidos na superfície nas microesferas de ACP também acelera o crescimento de ACP. Um fenômeno interessante emergiu a 60 min ou 160 °C, estas folhas ou bastões também são desenvolvidos a partir de nanopartículas de ACP (como mostrado nas caixas vermelhas), o que é confirmado pela análise DTA na Fig. S1. Um pico exotérmico a 650 °C é observado nas curvas DTA, o que é atribuído à cristalização de ACP. O pico exotérmico gradually torna-se fraco com o aumento do tempo hidrotérmico ou temperatura, implicando que a transformação de ACP nos produtos em direção a fosfato de cálcio cristalino.

A constituição química e estrutura de amostras sintetizadas com Ca/P = 3,3 sob diferentes tempos hidrotérmicos ou temperaturas são investigadas pelo FTIR e XRD. Como mostrado na Fig. 5a, os picos característicos de íons PO₄³⁻ de HAp estão localizados a 1037 cm⁻¹ e 603 cm⁻¹. O pico a 1122 cm⁻¹ é atribuído ao pico característico de íons PO₄³⁻ de ACP. Os picos de absorção a 1620 cm⁻¹ e 1383 cm⁻¹ são atribuídos aos picos característicos de grupos C=O e C-O de CG, respectivamente. O pico de absorção a 912 cm⁻¹ refere-se à vibração de estiramento assimétrica P-O de ATP. Ao aumentar o tempo hidrotérmico ou temperatura, a intensidade dos picos característicos de CG e ATP diminui gradualmente, indicando que as moléculas de ATP e CG ou seus derivados adsorvidos na superfície das microesferas são further hidrolisados. Enquanto isso, a intensidade do pico característico de íons PO₄³⁻ em HAp apresenta tendência de aumento gradual com a diminuição da intensidade do pico característico de ACP, iluminando a transformação de fase cristalina dos produtos em direção à fase HAp.

A Figura 5b mostra padrões XRD de diferentes amostras. Um característico "hump" de fase amorfa em torno de 2θ = 30° de microesferas sintetizadas a 5 ou 15 min é observado. No entanto, quando o tempo hidrotérmico é estendido para 60 min ou temperatura aumentada para 160 °C, a fase cristalina das microesferas transforma thoroughly para HAp, que poderia ser indexada como dados padrão (JDCPS no. 09-0432). A melhoria na intensidade relativa dos planos de rede (211), (300) e (002) poderia further explicar o aumento na cristalinidade dos produtos. Assim, os resultados de XRD e FTIR further confirmam a transformação de fase cristalina dos produtos com o aumento da temperatura ou tempo hidrotérmico.

Microesferas Yolk-Shell ATP-CL

Para comparar comportamento de adsorção de fármaco, as outras microesferas com estrutura yolk-shell foram preparadas usando CL como fonte orgânica de cálcio através do método hidrotérmico por micro-ondas. Em termos de morfologia, as amostras ainda consistem de microesferas com estrutura yolk-shell, o que é verificado pelas esferas quebradas (inserção na Fig. 6a) e imagens de MET (Fig. 6b, c). O resultado demonstra que a mudança na fonte de cálcio não tem efeito significativo na morfologia dos produtos. Além disso, a difração eletrônica de área selecionada (SAED) mostra pontos SAED discretos (Fig. 6d), demonstrando que microesferas bem cristalizadas são obtidas. Além disso, o mapeamento EDS exibe distribuição uniforme de elementos Ca, P e O nas microesferas (Fig. 6e). Os espectros EDS correspondentes também confirmam a presença de elementos Ca, P e O nas microesferas (Fig. 6f), indicando que as microesferas preparadas são fosfato de cálcio.

Adsorção de HEL e Mecanismo de Adsorção das Microesferas

Como mostrado na Fig. 7, a capacidade de adsorção de dois tipos de microesferas aumenta com o aumento da concentração inicial de HEL. Quando a concentração inicial de HEL aumenta para 6,5 mg/mL, a capacidade de adsorção das microesferas ATP-CG atinge um platô e a capacidade máxima de adsorção das microesferas é cerca de 332 ± 36 mg/g (Fig. 7a), que é cerca de duas vezes maior que a das microesferas ATP-CL (176 ± 33 mg/g, 6 mg/mL, Fig. 7b).

O resultado de adsorção de HEL é further suportado pelos espectros FTIR e curvas TG. Como mostrado na Fig. 8a, b, os picos de absorção a 1134 cm⁻¹ (1139 cm⁻¹) e 563 cm⁻¹ (568 cm⁻¹) atribuídos ao pico característico de íons PO₄³⁻ de ACP e 1039 cm⁻¹ (1040 cm⁻¹) atribuído ao pico característico de íons PO₄³⁻ de HAp são observados nas microesferas adsorvidas com HEL, o que indica que a introdução de HEL nas microesferas não causa qualquer mudança significativa na estrutura das microesferas. Os picos de adsorção a 1542 cm⁻¹ e 1545 cm⁻¹ atribuídos ao grupo amida de HEL são observados nas microesferas adsorvidas com HEL, confirmando que HEL é adsorvido com sucesso nas microesferas. Enquanto isso, as bandas de adsorção a 2966, 2962, 2935 e 2927 cm⁻¹ originadas de grupos -CH₃ e -CH₂ de HEL também são detectadas nas microesferas adsorvidas com HEL, o que further verifica a presença de HEL nas microesferas. As curvas TGA mostram que a perda de peso das microesferas ATP-CG antes e após adsorção de HEL é 11,3% e 36,7%, respectivamente (Fig. 8c). Portanto, a capacidade de adsorção de HEL das microesferas ATP-CG é aproximadamente 340 mg/g. No entanto, uma perda de peso de 21,1% de ATP-CL é obtida antes da adsorção de HEL e 37% aparece nas microesferas adsorvidas com HEL (Fig. 8d). Então, a capacidade de adsorção de HEL é 189 mg/g para microesferas ATP-CL. Os resultados de TGA são próximos ao resultado da Fig. 7.

Para investigar a causa da diferença de capacidade de adsorção entre dois tipos de microesferas, os dados de adsorção de equilíbrio das microesferas são further analisados de acordo com modelo de isoterma D-R. As curvas de ajuste são mostradas na Fig. 9 e parâmetros de ajuste estão listados na Tabela 1, respectivamente. Dos resultados de ajuste, o coeficiente de correlação de ATP-CG é maior que ATP-CL, sugerindo que modelo D-R é adequado para descrever o comportamento de adsorção de fármaco das microesferas ATP-CG. Como o valor de E está abaixo de 8 kJ/mol, a adsorção de HEL nas microesferas ATP-CG é sorção física. A capacidade máxima (Qm) das microesferas ATP-CG para HEL poderia alcançar até perto de 381 mg/g, que é próximo ao resultado da Fig. 7a.

Como a adsorção de HEL nas microesferas ATP-CG é sorção física, o potencial de superfície das microesferas é investigado. Como mostrado na Fig. 10a, o valor de potencial zeta de ATP-CG, microesferas ATP-CL e HEL em água ultrapura é -17 mV, -22 mV e 20 mV, respectivamente. Após adsorção de HEL, o valor de potencial zeta de microesferas ATP-CG e ATP-CL muda para 2,7 mV e 1,5 mV, respectivamente, indicando que a adsorção de moléculas de HEL na superfície das microesferas ocorre através de força eletrostática atrativa. No entanto, a força eletrostática atrativa não é a causa principal da diferença de capacidade de adsorção entre dois tipos de microesferas, porque não há diferença significativa nos valores de potencial zeta (-17 mV e -22 mV) entre microesferas.

Portanto, para further iluminar a razão causando diferença de capacidade de absorção entre microesferas, a área superficial específica das microesferas é investigada. Como mostrado na Fig. 11a, a área superficial específica BET (SBET) das microesferas ATP-CG é 143 m²/g, que é aproximadamente três vezes maior que a das microesferas ATP-CL (55 m²/g, Tabela 2). Então, a área superficial específica pode contribuir para a diferença de capacidade de absorção entre microesferas. Tal alta área superficial específica das microesferas ATP-CG é principalmente atribuída à baixa cristalinidade. Da Fig. 11b, microesferas ATP-CG exibem menor cristalinidade que a de microesferas ATP-CL. Além disso, a diferença de cristalinidade entre ATP-CG e ATP-CL é principalmente devido às diferentes condições de síntese. Geralmente, a cristalinidade do produto aumenta com a extensão de hidrólise dos reagentes sob certa pressão e temperatura. Aqui, a acidez do ácido gluconico (pKa = 3,39) é maior que ácido L-lático (pKa = 3,86), o que causaria taxa de hidrólise mais lenta e ultimately apresentaria menor cristalinidade. Como resultado, microesferas ATP-CG com maior área superficial específica são obtidas mudando a fonte de cálcio.

Conclusões

As microesferas yolk-shell ATP-CG foram projetadas usando ATP como fonte orgânica de fósforo e CG como fonte orgânica de cálcio através de método hidrotérmico assistido por micro-ondas. As microesferas exibem alta área superficial específica e alta capacidade de adsorção. As influências de Ca/P, temperatura hidrotérmica e tempo na morfologia e estrutura das microesferas também foram investigadas. O estudo indica que fonte orgânica de fósforo e fonte orgânica de cálcio têm efeito significativo na formação de microesferas com estrutura yolk-shell. Além disso, as condições hidrotérmicas incluindo Ca/P, tempo hidrotérmico e temperatura são responsáveis pela formação de microesferas yolk-shell. Além disso, descobrimos que a área superficial específica e propriedades químicas de superfície como potencial de superfície são dois fatores-chave que afetam a capacidade de adsorção das microesferas comparando o comportamento de adsorção de HEL de dois tipos de microesferas sintetizadas com diferentes fontes de cálcio.