Nanopartículas de Quitosana Funcionalizadas com Biotina e Sensíveis a Redox Revestidas com Ficocianina para Entrega Direcionada de Curcumina

Resumo

Neste estudo, foram desenvolvidas nanopartículas carregadas de curcumina (CUR) e funcionalizadas com ficocianina (PC), denominadas CUR-BCSC@PCs, baseadas em oligossacarídeo de quitosana biotinilado com ácido ditiodipropiônico (BCSC). O objetivo foi melhorar a biocompatibilidade da curcumina. A estrutura do BCSC foi confirmada por RMN de ¹H. As CUR-BCSC@PCs apresentaram diâmetro hidrodinâmico médio de 160,3 ± 9,0 nm, e a coroa proteica biomimética conferiu excelente estabilidade e potencial para evitar adsorção proteica na circulação sanguínea. Ensaios de liberação in vitro demonstraram que as nanopartículas com cascas sensíveis a redox respondem a altas concentrações de glutationa. Além disso, as CUR-BCSC@PCs aumentaram eficazmente a atividade inibitória sobre a proliferação de células A549, potencializando a captação intracelular de CUR. Os resultados indicam que as CUR-BCSC@PCs têm grande potencial de aplicação na terapia do câncer como carreadores de fármacos eficazes.

Introdução

O oligossacarídeo de quitosana (COS), com estrutura β-(1-4)-ligada de D-glucosaminas, é um produto de despolimerização obtido principalmente por desacetilação e hidrólise enzimática da quitosana ou quitina, derivadas de exoesqueletos de artrópodes ou paredes celulares de fungos. Vale notar que metais pesados e corantes podem ser removidos pela quitosana e suas formas modificadas, nas quais a quitosana atua como adsorvente. Diversos estudos demonstram que o COS possui propriedades biológicas como atividade anticâncer, anti-inflamatória, antioxidante e imunoestimuladora. O COS é considerado um material carreador de fármacos não tóxico, devido à sua biocompatibilidade, alta solubilidade em água e modificabilidade química.

Para melhorar a solubilidade de fármacos anticâncer hidrofóbicos e reduzir a toxicidade a tecidos normais, pesquisadores têm estudado copolímeros que se auto-organizam em micelas de determinado intervalo de tamanho. Essas montagens copoliméricas podem atingir e penetrar o sítio tumorar passiva ou ativamente. As micelas são compostas por duas seções funcionais: o núcleo, onde fármacos hidrofóbicos são encapsulados, e a casca externa ou coroa, que controla as propriedades farmacocinéticas in vivo. Wang et al. enxertaram ácido deoxicólico em cadeias de COS por modificação química para formar copolímeros bloco anfifílicos, que se auto-organizam em micelas em solventes inorgânicos de baixo custo. O núcleo hidrofóbico das micelas continha quercetina, o que melhorou significativamente a solubilidade em água de fármacos anticâncer e, por consequência, a biodisponibilidade da quercetina.

A curcumina (CUR) é um dos principais constituintes químicos da cúrcuma. Nos últimos anos, muitos pesquisadores estudaram as propriedades anticâncer da CUR, confirmando que este composto pode influenciar o crescimento de células tumorais via diversas vias de sinalização e fortalecer o sistema imunológico. Além disso, a CUR é um fotossensibilizador com boas propriedades fotodinâmicas. Assim, a CUR é um fármaco promissor para terapia do câncer. No entanto, sua baixa solubilidade, estabilidade e biodisponibilidade limitam sua aplicação clínica. Para mitigar essas desvantagens, muitos pesquisadores melhoraram a biodisponibilidade da CUR através de sistemas de liberação de fármacos. Por exemplo, Chen et al. projetaram um novo tipo de carreador duplamente sensível a pH, que aumentou a solubilidade da CUR em água e melhorou seu efeito no tratamento de tumores.

A ficocianina (PC), obtida principalmente de cianobactérias, é uma proteína pigmentar captadora de luz solúvel em água, que atua na captura e transferência de luz em energia química durante a fotossíntese. A PC exerce múltiplas propriedades biológicas, como atividade anticâncer, anti-inflamatória e antioxidante, atraindo atenção nas áreas de alimentos e medicina. Hao et al. descobriram que a PC inibiu o crescimento de células de câncer de pulmão de não pequenas células pela regulação negativa da proteína adaptadora contendo domínio TIR (TIRAP). Além disso, a PC também é usada na terapia fotodinâmica (TFD) de tumores como agente excelente sem efeitos colaterais. A utilização da PC como sondas fluorescentes requer conjugação com elementos de identificação específicos como biotina, anticorpos e estreptavidina. A biotina, uma vitamina hidrossolúvel, é um micronutriente essencial no corpo humano, com propriedades de direcionamento tumoral. As proteínas receptoras específicas de biotina, como avidina, neutravidina e estreptavidina, são superexpressas na superfície de várias células cancerosas em comparação com células normais. Assim, nanopartículas biotiniladas têm sido extensivamente estudadas para liberação de fármacos via endocitose mediada por receptores.

No presente estudo, um novo tipo de nanocarreador funcionalizado com PC foi construído. A ligação dissulfeto entre COS e CUR conferiu sensibilidade redutiva ao material carreador anfifílico. A CUR foi localizada no núcleo interno hidrofóbico protegido pela casca COS/PC. A interação entre biotina e PC e a interação eletrostática entre COS carregado positivamente e PC carregado negativamente foram usadas para modificar a PC na superfície das CUR-BCSCs. Esperava-se que as CUR-BCSC@PCs atingissem tecidos tumorais devido à permeabilidade melhorada, ao efeito de permeabilidade e retenção aumentada (EPR) e ao efeito de direcionamento do receptor de biotina. No microambiente tumoral, que apresenta maior concentração de glutationa que células normais, as CUR-BCSC@PCs se desintegram por reações de troca tiol-dissulfeto, alcançando alta concentração do fármaco nas células tumorais. O sistema nano-carreador CUR-BCSC@PC descrito neste trabalho não apenas melhorou a biodisponibilidade da CUR, mas também tem potencial para ser eficaz no tratamento clínico de tumores.

Materiais e Métodos

Materiais

A CUR foi adquirida da Zhanyun Chemical Co., Ltd. (Xangai, China). O COS foi obtido da Shandong Weikang Biomedical Science and Technology Co., Ltd. A PC foi adquirida da Zhejiang Binmei Biotechnology Co., Ltd. O ácido 3,3-ditiodipropiônico foi obtido da Adamas Reagent Co., Ltd. (Xangai, China). Cloridrato de carbodiimida carbonizada (EDCI), dimetilamino piridina (DMAP), tetrahidrofurano (THF), cloreto de oxalila e biotina foram adquiridos da Aladdin Chemistry Co., Ltd. L-Glutationa (GSH) e Hoechst 33342 foram obtidos da Sigma-Aldrich (Xangai, China). Bolsas de diálise (PMCO 300 Da) foram adquiridas da Beijing Biotopped Technology Co., Ltd. Formamida foi preparada pela Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd. Água deionizada foi preparada no laboratório.

A linhagem celular A549 (células de carcinoma pulmonar humano) (Bena Culture Collection, Pequim, China) foi escolhida para avaliar a citotoxicidade do novo nanocarreador. As células A549 foram cultivadas em DMEM (Saiersi Biotechnology Co., Ltd., Shandong, Yantai, China). Soro fetal bovino (SFB) foi obtido da Hyclone (Logan, UT, EUA). Penicilina e estreptomicina foram adquiridas da Sigma-Aldrich (Xangai, China). Brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2-H-tetrazólio (MTT) também foi adquirido da Sigma-Aldrich (Xangai, China).

Síntese das CUR-BCSC@PCs

As rotas sintéticas para preparar as CUR-BCSC@PCs são mostradas na Fig. 2. Os procedimentos experimentais detalhados são descritos abaixo.

Síntese do COS-S-S-CUR

O COS funcionalizado com ácido 3,3-ditiodipropiônico foi sintetizado por esterificação catalisada por cloreto de ácido via reação em duas etapas.

Etapa 1: Ácido 3,3-ditiodipropiônico (42,05 mg, 0,25 mmol) e THF seco (4 mL) foram colocados em um balão de fundo redondo âmbar com agitador para dissolver o ácido. Em seguida, cloreto de oxalila (0,3 mmol) diluído em THF foi adicionado ao balão, mantido em banho de gelo. A reação foi mantida a 35 °C. Após agitação por 3 h, o cloreto de oxalila não reagido foi removido por evaporação rotativa. O Produto 1 foi preparado pelos passos acima. A CUR foi dissolvida em 3 mL de THF contendo 34 μL de trietilamina, adicionada gota a gota ao balão contendo o Produto 1 sob condições de banho de gelo e agitada por 15 min. Posteriormente, a mistura foi agitada a 50 °C sob atmosfera de nitrogênio por 6 h. O produto obtido foi submetido a destilação rotativa para remover trietilamina e THF e purificado por cromatografia em coluna para obter o produto puro HOOC-S-S-CUR.

Etapa 2: O produto puro HOOC-S-S-CUR foi ativado com EDCI (1,2 eq) e DMAP (1,2 eq) em formamida por 2 h. Subsequentemente, COS dissolvido em 4 mL de formamida foi adicionado e agitado a 55 °C por 12 h. Após a reação completa, a solução foi dialisada com bolsa de diálise (PMCO 300 Da) e liofilizada por 12 h.

Síntese do BCSC e Biotina-COS

Em resumo, biotina, EDCI e DMAP foram dissolvidos em 3 mL de formamida e transferidos para um balão de fundo redondo âmbar. Após agitação por 2 h a 30 °C, o COS-S-S-CUR foi dissolvido em 3 mL de formamida e adicionado gota a gota ao balão. A reação foi mantida a 45 °C por 2 dias. Os produtos finais foram dialisados (PMCO 300 Da) em água deionizada e submetidos a centrifugação e liofilização para obter o BCSC sensível a redox. Além disso, a síntese de biotina-COS foi conduzida pelo mesmo método para ligar biotina às cadeias de COS.

O RMN de ¹H do COS-S-S-CUR, BCSC e biotina-COS foram medidos usando uma mistura de DMSO-D₆ e D₂O como solvente.

Preparação de Micelas BCSC Carregadas com CUR (CUR-BCSCs)

As CUR-BCSCs foram preparadas pelo método de auto-organização. Dez miligramas de BCSC foram dissolvidos em 4 mL de formamida e misturados com 1 mL de solução de CUR (1 mg/mL) dissolvida em formamida. A solução mista foi dialisada usando bolsa de diálise (PMCO 300 Da) em água deionizada por 24 h, trocando a água a cada 2 h. As CUR-BCSCs foram filtradas usando membranas de 800 nm, 450 nm e 220 nm.

Preparação das CUR-BCSC@PCs

As CUR-BCSCs preparadas foram misturadas com solução aquosa de PC (1,0 mg/mL) e incubadas por 30 min a 4 °C. Subsequentemente, a PC foi removida usando filtro centrífugo de 100 kDa e lavada com água três vezes. O produto final (CUR-BCSC@PC) foi armazenado a 4 °C no escuro para estudos posteriores.

Caracterizações

Medidas de espalhamento dinâmico de luz (DLS) foram realizadas em um Analisador de Partículas Delsa Nano C (Beckman Coulter Inc.) para observar tamanho de partícula, potencial zeta e índice de polidispersibilidade (PI). A morfologia das CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs foi confirmada por microscopia eletrônica de transmissão (MET, H-600; Hitachi, Tóquio, Japão).

Eficiência de Encapsulamento (EE) e Capacidade de Carga de Fármaco (DL)

HPLC (Agilent 1260GB12C) foi usado para determinar EE e DL das nanopartículas. Primeiro, 2 mL de CUR-BCSCs ou CUR-BCSC@PCs foram misturados com 3 mL de acetonitrila e desestabilizados por ultrassom, adicionando-se acetonitrila até 10 mL. Antes da medição, a temperatura da coluna Phenomenex C18 (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) foi ajustada a 25 °C, enquanto a taxa de fluxo da fase móvel foi definida a 1,0 mL·min⁻¹. A proporção de ácido acético glacial a 0,5% para acetonitrila foi 40:60 (v/v). No processo de detecção, com comprimento de onda de detecção de 425 nm, 20 μL de amostras foram injetados. As fórmulas a seguir foram usadas para calcular EE e DL:

EE% = (Peso de Cur nas nanopartículas / Peso da Cur de alimentação) × 100%

DL% = (Massa de Cur nas nanopartículas / Massa das nanopartículas) × 100%

Teste de Estabilidade In Vitro

PBS contendo GSH (0, 20 μM, 10 mM) foi preparado e tratado com CUR-BCSC@PCs por 4 h para observar mudanças no tamanho de partícula sob diferentes concentrações de glutationa a 37 °C. Além disso, o diâmetro hidrodinâmico das CUR-BCSC@PCs foi investigado em solução PBS usando Analisador de Partículas Delsa Nano C (Beckman Coulter Inc.) a 37 °C em diferentes pontos de tempo (4, 8, 12 e 24 h).

Liberação In Vitro de CUR das CUR-BCSC@PCs

Os comportamentos de liberação in vitro de CUR das CUR-BCSC@PCs foram investigados pelo método de diálise. Soluções PBS contendo glutationa (GSH: 20 μmol/L, 1 mmol/L, 5 mmol/L, 10 mmol/L) foram preparadas, adicionando-se 0,5% de Tween 80. PBS (45 mL) contendo diferentes concentrações de GSH foi adicionado a tubos de centrífuga de 50 mL; então, uma bolsa de diálise contendo 1 mL de CUR-BCSC@PCs foi colocada em cada tubo, agitado a 37 °C. Em diferentes pontos de tempo (0,2, 1, 4, 8, 12, 24, 48, 72 h), 2 mL do meio de liberação foram coletados, e meio fresco do mesmo tipo foi adicionado para manter o volume inalterado. HPLC foi usado para determinar a concentração de CUR no meio de liberação coletado.

Cultura Celular

As células de carcinoma pulmonar humano A549 foram cultivadas em DMEM contendo 10% SFB e 1% penicilina-estreptomicina, incubadas a 37 °C em atmosfera de 5% CO₂.

Inibição da Proliferação Celular In Vitro

A citotoxicidade in vitro de CUR livre, micelas BCSC (BCSCs), CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs contra a linhagem celular A549 foi avaliada usando ensaio MTT padrão. As células A549 foram semeadas em placas de 96 poços (5000 células por poço) por 24 h para adesão. O meio original foi descartado, e 100 μL de meio fresco contendo CUR livre, BCSCs, CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs (0,1, 1, 5, 10, 15 e 20 μg/mL baseados em CUR) foram adicionados e cultivados por 24 h. Poços sem administração foram usados como controles em branco. As células foram submetidas a ensaio MTT removendo o meio e adicionando 20 μL de solução de MTT (5 mg/mL). Após incubação por mais 4 h a 37 °C em 5% CO₂, a solução de MTT foi substituída por 150 μL de DMSO para dissolver o formazano MTT roxo. Subsequentemente, um leitor de microplacas (Thermo Fisher Scientific Co., Waltham, MA) foi usado para medir a absorbância de cada poço a 570 nm.

Captação e Localização Celular In Vitro

A capacidade de captação celular das CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs foi investigada sob microscópio de fluorescência (FM, Eclipse E400; Nikon Corporation, Tóquio, Japão). Células A549 foram semeadas em placas de 24 poços a 4 × 10⁴ células por poço e co-incubadas com CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs (concentração de CUR: 20 μg/mL) a 37 °C em atmosfera umificada contendo 5% CO₂ por 1, 2 e 4 h. As células A549 foram lavadas com PBS três vezes após remoção do meio de cultura contendo fármacos. Em seguida, PBS contendo 4% paraformaldeído foi adicionado por 20 min e lavado com PBS mais três vezes. Os núcleos celulares foram corados com Hoechst 33342 por 15 min e observados usando microscópio de fluorescência invertido.

Análise Estatística

Todos os experimentos foram realizados pelo menos três vezes e expressos como médias ± DP. Testes estatísticos foram analisados usando teste t de Student. P < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo, e P < 0,01 considerado altamente significativo.

Resultados e Discussão

Caracterização do COS, COS-S-S-CUR, Biotina-COS e BCSC

As principais ressonâncias características da CUR e CH₂-S-S-CH₂ apareceram no espectro de RMN de ¹H do COS-S-S-CUR, comprovando a conjugação bem-sucedida da CUR às cadeias de COS. Comparado com os picos do COS na Fig. 3(A), os sinais característicos da CUR apresentados na Fig. 3(B) foram observados na região entre 6,7 e 7,5 ppm e em 3,75 ppm (−OCH₃), enquanto a ressonância de CH₂-S-S-CH₂ a 2,5 ppm permaneceu inalterada. Como mostrado na Fig. 3(C), a, b, os picos da biotina no espectro de RMN de ¹H do Biotina-COS foram 0,99 ppm (−CH₂–) e 3,39 ppm (−CH–S–). O espectro de RMN de ¹H do BCSC é mostrado na Fig. 3(D). As ressonâncias da CUR (Fig. 3(D), a, e) foram vistas nas posições correspondentes, e o pico característico de CH₂-S-S-CH₂ (Fig. 3(D), b) foi novamente observado a 2,5 ppm. Além disso, o aparecimento de sinais nos picos 0,09 ppm e 3,39 ppm (Fig. 3(D), c, d) verificou a existência de biotina ligada às cadeias COS-S-S-CUR. As ressonâncias características da CUR, CH₂-S-S-CH₂ e biotina mostradas na Fig. 3(D) são consistentes com as da Fig. 3(B) e Fig. 3(C), indicando que o material anfifílico BCSC foi sintetizado com sucesso.

Caracterização das CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs

A morfologia das CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs foi estudada por microscopia eletrônica de transmissão (MET) (Fig. 4A, B). As CUR-BCSCs mostraram forma esférica lisa (Fig. 4A, a) sob microscopia eletrônica, enquanto as CUR-BCSC@PCs possuíram forma aproximadamente esférica com camada florida circundando as CUR-BCSC@PCs (Fig. 4B, b). Isso indicou que a PC formou uma estrutura de coroa proteica cobrindo as superfícies das CUR-BCSCs. Um claro efeito Tyndall das CUR-BCSC@PCs foi observado devido à existência de abundantes nanopartículas (Fig. 4C). O tamanho de partícula, PI, potencial zeta, DL (%) e EE (%) das CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs estão ilustrados na Tabela 1. Na Fig. 5, o tamanho médio das CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs foi 97,8 ± 4,2 nm e 160,3 ± 9,0 nm, respectivamente. Enquanto isso, os valores de PI das CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs foram 0,181 ± 0,014 e 0,114 ± 0,024, respectivamente, menores que 0,2, indicando uniformidade de seus tamanhos. Os potenciais zeta das CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs foram 21,57 ± 0,53 e 12,90 ± 1,93 mV, respectivamente. Devido ao revestimento de PC eletronegativo, o potencial zeta das CUR-BCSCs foi maior que o das CUR-BCSC@PCs. A EE das CUR-BCSC@PCs foi maior que a das CUR-BCSCs.

Estabilidade das CUR-BCSC@PCs

Como mostrado na Fig. 6a, devido à natureza redutiva da ligação dissulfeto, esta foi clivada em PBS contendo 10 mM GSH, e as CUR-BCSC@PCs se desintegraram em fragmentos poliméricos, que se aglomeraram aumentando o tamanho de partícula das nanopartículas. No entanto, em PBS contendo 20 μM GSH, as mudanças no tamanho de partícula foram menores, mostrando resultado semelhante ao PBS sem GSH. Como ilustrado na Fig. 6b, o tamanho de partícula foi medido em diferentes tempos para estudar a estabilidade das CUR-BCSC@PCs em PBS, e os resultados mostraram que o tamanho de partícula das CUR-BCSC@PCs aumentou lentamente ao longo do tempo.

Resposta Redutiva das CUR-BCSC@PCs

É bem estabelecido que ligações dissulfeto são instáveis em ambiente redutivo tumoral. Pesquisadores têm usado ligações dissulfeto para conectar polímeros hidrofílicos e fármacos hidrofóbicos para preparar fragmentos anfifílicos, que se auto-organizam em água formando nano-micelas. Então, de acordo com diferenças no ambiente fisiológico e tumoral, as ligações dissulfeto se rompem no sítio tumoral para liberar fármacos. No presente estudo, a liberação in vitro de fármaco foi conduzida para verificar se as CUR-BCSC@PCs poderiam apresentar propriedade de liberação esperada. A capacidade de resposta redutiva das CUR-BCSC@PCs contendo ligações dissulfeto foi investigada após ativação por GSH. Como mostrado na Fig. 7, a liberação de CUR das CUR-BCSC@PCs no meio com 20 μM GSH a pH 7,4, que simulou o ambiente extracelular, foi extremamente lenta comparada a um ambiente com 10 mM GSH a pH 7,4. Além disso, comparado ao meio com 20 μM GSH, os de 1, 5 e 10 mM GSH mostraram diferenças significativas no comportamento de liberação. Com o aumento da concentração de GSH, a liberação de CUR das CUR-BCSC@PCs também foi promovida, indicando que a liberação do fármaco respondeu à concentração de GSH.

Citotoxicidade In Vitro

O ensaio MTT foi conduzido para investigar os efeitos citotóxicos de CUR livre, BCSCs, CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs em linhagens celulares A549. Os dados de viabilidade celular são resumidos na Fig. 8. Todos os preparados de CUR mostraram dependência de dose em termos de inibição da proliferação celular. Como mostrado na Fig. 8, a CUR livre teve capacidade ligeiramente menor de inibir a proliferação celular contra todas as células A549 comparada com CUR-BCSC@PCs e CUR-BCSCs, após incubação por 24 h. Para células A549, a atividade anticâncer das CUR-BCSC@PCs foi melhor que a de BCSCs e CUR-BCSCs, provavelmente devido à excelente captação celular. Além disso, as CUR-BCSC@PCs mostraram maior propriedade citotóxica que as CUR-BCSCs, indicando que a PC tem potencial efeito inibitório na proliferação de células A549.

Estudo de Captação Celular In Vitro

Como mostrado na Fig. 8, os sinais de fluorescência da CUR foram observados em células A549 tratadas com CUR-BCSCs e CUR-BCSC@PCs (CUR: 20 μg/mL) a 1, 2 e 4 h, usando microscópio de fluorescência invertido. A CUR, como sonda de fluorescência verde, também é um fármaco anticâncer, frequentemente usada como fármaco modelo hidrofóbico para desenvolver novos e eficientes sistemas de liberação. Como ilustrado na Fig. 9a, tanto CUR-BCSCs quanto CUR-BCSC@PCs foram absorvidas em linhagens celulares A549, e a eficiência de captação foi dependente do tempo. Devido aos receptores de biotina superexpressos na superfície de células cancerosas, nano-micelas carregadas de biotina tiveram afinidade por células A549. Os sinais de fluorescência das CUR-BCSC@PCs foram altos a 4 h, indicando alta taxa de captação celular das CUR-BCSC@PCs. Os sinais de fluorescência das CUR-BCSC@PCs foram maiores a 4 h que a 1 h ou 2 h; isso provou que a captação celular foi dependente do tempo.

Os núcleos das células A549 foram corados com Hoechst 33342. Como mostrado na Fig. 9b, sinais de fluorescência verde foram vistos no citoplasma do grupo de 1 h de CUR-BCSC@PCs, e a fluorescência ocorreu gradualmente nos núcleos do grupo de 4 h de CUR-BCSC@PCs, demonstrando captação celular via endocitose mediada por caveolas.

Conclusões

Neste estudo, um tipo de nanopartícula de COS funcionalizada com proteína foi preparado através de reações de condensação, comportamento de auto-organização e interação entre PC e CUR-BCSCs. Após investigação preliminar, os materiais carreadores anfifílicos (BCSCs) com sensibilidade redox foram sintetizados com sucesso e verificados por RMN de ¹H. As superfícies das CUR-BCSCs foram modificadas com uma camada de coroa de ficocianina, que pode melhorar a eficiência de captação celular e proteger as CUR-BCSC@PCs da adsorção de proteínas plasmáticas. A análise de citotoxicidade e captação celular indicou que as CUR-BCSC@PCs podem transportar CUR para dentro das células A549 e têm excelente propriedade antiproliferativa. Considerando o efeito TFD da PC e CUR, avaliaremos propriedades fotodinâmicas e atividade anticâncer das CUR-BCSC@PCs sob fototerapia na próxima fase desta pesquisa. Este estudo pavimentou o caminho para a melhoria da eficácia de fármacos anticâncer e a introdução de uma coroa proteica funcional. Em resumo, o biomaterial carreador nanomedicinal de CUR-BCSC@PCs baseado em COS com múltiplas funções forneceu nova estratégia para tratamento de tumores e exibiu grandes perspectivas de aplicação.